우리의 모델은 탈수 초화 질환, 특히 다발성 경화증과 매우 관련이 있습니다. 그리고 관련 임상적으로 관련된 연구를 발전시키는데 기여할 수 있다. 외과적 절차를 통해 마우스에서 심각한 탈수초화를 빠르고 안정적으로 직접 유발할 수 있는 상세한 프로토콜입니다.
이 기술을 처음 시도하는 동안 인내심을 갖고 좌표가 정확한지 확인하십시오. 32 게이지 바늘을 5 마이크로 리터 주사기에 연결하여 시작하십시오. 주사 준비를 위해 5 마이크로 리터의 LPC 용액을 회수하십시오.
다음으로, 호흡이 원활한 동안 발가락 핀치 반사가 부족하여 마우스의 마취 깊이를 확인하십시오. 등쪽이 위로 향하도록 정위 프레임에 마우스를 놓고 코뿔과 치아 클램프로 머리를 고정합니다. 마우스를 양측 이어 바가있는 정위 장치에 고정하십시오.
이어바가 수평이고 헤드가 수평이고 안정적인지 확인하십시오. 요오드 포로 닦아서 머리 피부를 소독하십시오. 그런 다음 메스를 사용하여 두피의 정중선을 따라 약 1.5cm의 작은 절개를 잘라 두개골을 노출시킵니다.
브레그마, 람다, 후방 천문이 노출될 때까지 1% 과산화수소에 적신 면봉으로 스킬을 닦습니다. 주사기를 정위 장치에 놓습니다. 동물 머리의 수평 위치를 확인하고 뇌량을 찾습니다.
주사 부위가 결정되면 좌표를 기록하고 두개골에 마커로 표시하십시오. 두개골 드릴로 표시된 부위를 부드럽게 뚫습니다. 출혈을 피하도록주의하십시오.
바늘을 주어진 좌표로 천천히 움직입니다. 뇌량 탈수초화를 유도하려면 분당 2마이크로리터의 속도로 각 주사 부위에 0.4마이크로리터의 LPC 용액을 주입합니다. 주사 후 바늘을 각 부위에 10 분 더 유지하십시오.
마지막으로 4-0 봉합사로 피부를 봉합하고 동물이 10 분 이내에 깨어날 때까지 기다리십시오. 대표 이미지는 Luxol 패스트 블루 염색을 통한 백질 군단의 검출을 보여줍니다. 결과로부터, 뇌량의 안정적인 탈수 초화는 주사 후 10 일 및 28 일에 볼 수 있습니다.
다른 시점에서의 탈수초화 영역의 정량화가 여기에 표시됩니다. 분해된 미엘린 염기성 단백질을 면역형광 염색을 통해 주사 후 10일에 LPC 주입군에서 dMBP의 현저한 증가가 관찰되었으며, 이는 뇌량에서 미엘린 손실을 나타냅니다. 미엘린 염기성 단백질 또는 MBP 발현의 웨스턴 블롯 분석은 LPC 주입 후 MBP의 현저한 손실을 나타내었다.
베타-액틴을 기준선 발현을 측정하기 위한 로딩 대조군으로 사용하였다. 전자 현미경 이미지는 가짜 그룹과 LPC 주입 그룹의 뇌량에서 수초화 된 미세 구조를 확인합니다. GST-pi는 희소돌기아교세포 전구세포 또는 OPC 분화 성숙의 마커입니다.
LPC 주입 10 일 후, GST-pi는 가짜 그룹에 비해 감소했다. 동시에, 희소돌기아교세포의 증식 능력은 희소돌기아교세포 증식과 전체 희소돌기아교세포 계통 세포의 비율에 의해 반영될 수 있다. 더 높은 비율은 주사 후 10일 후에 희소돌기아교세포의 더 많은 증식을 나타냅니다.
대표 이미지는 각 그룹의 마우스의 수영 경로, 플랫폼의 존재 및 플랫폼을 제거한 후의 경로를 보여줍니다. 결과는 탈수초된 마우스의 공간 기억이 2점 LPC 주입 모델에서 유의하게 손상되었음을 시사한다. 이 절차를 시도하는 동안 주입 속도가 정확한지 확인하고 바늘을 각 부위에 추가로 10분 동안 유지하십시오.
