يحاكي نموذج الفأر المستخدم في هذه الدراسة بشكل فعال تأثير ابتلاع النيكوتين المزمن والتعرض المتكرر للسيليكا على تليف الرئة من خلال انتقال اللحمة المتوسطة الظهارية لدى البشر. تم تحقيق نموذج جزء هيئة المحلفين عن طريق الحقن تحت الجلد للنيكوتين والتنقيط الأنفي للسيليكا بطريقة بسيطة وموثوقة. تعليق السيليكا البلورية المعقمة في المياه المالحة لإعداد 20 ملليغرام لكل لتر تعليق.
تذبذبه في حمام مائي يهتز بالموجات فوق الصوتية لمدة 25 دقيقة. ضع تعليق السيليكا مع مذبذب دوامة لمدة ثلاث دقائق. نضح التعليق لخلطه ، ثم استخدم 50 ميكرولتر للتنقيط الأنفي.
لبدء التعرض للسيليكا ، أولا ، ضع الماوس المخدر على راحة يد واحدة وكشف تجويف الأنف للماوس. حقن 50 ميكرولتر من تعليق السيليكا من فتحة أنف واحدة في غضون أربع إلى ثماني ثوان. للسماح باختراق الرئة السريع للتعليق ، اضغط برفق على صدر الماوس بإصبع السبابة لمدة ثلاث إلى خمس ثوان ، مع تكرار الضغط ثلاث إلى خمس مرات كل ثانية للحفاظ على معدل التنفس.
بمجرد أن يعرض الفأر التنفس المنتظم ، ضعه تحت الملاحظة في قفص لمدة ثلاث دقائق. تحضير محاقن النيكوتين عن طريق سحب الهواء حتى علامة 0.2 ملليلتر في حقنة واحد ملليلتر. ثم ارسم 125 ميكرولترا من النيكوتين.
اضغط على المحقنة لملء الإبرة والواجهة الأمامية بالنيكوتين ، ثم ضعها في صينية محمية من الضوء. باليد اليمنى ، أمسك ذيل الماوس. عندما يسترخي الماوس ، استخدم الإبهام الأيسر والسبابة لتطبيق ضغط معتدل على الجلد من الذيل إلى حافة الأذن.
الآن ، حرر اليد اليمنى واستخدم الأصابع اليسرى والصغيرة والبنصر لقرص الذيل والأطراف الخلفية لشل حركة الماوس. امسك حقنة الحقن في اليد اليمنى وثقب الجلد على الجزء الخلفي من الرقبة في اتجاه الرأس إلى الذيل. حقن النيكوتين بمعدل موحد.
ثبت الماوس المخدر على لوحة اختبار الرغوة ورش الفراء بنسبة 75٪ كحول. قم بعمل شق على طول خط الوسط للبطن لكشف تجويف الصدر. قم بعمل قطع صغير في قمة الجانب الأيمن من القلب.
حقن 20 ملليلتر من PBS المبرد مسبقا ببطء وبشكل موحد من قمة القلب الأيسر ، مما يتسبب في تدفق الدم من الفتحة التي تم إنشاؤها في قمة القلب الأيمن. قم بإزالة شحمة الرئة بالكامل وقم بتبريدها عند درجة حرارة 80 درجة مئوية تحت الصفر. قم بتغذية الفئران المتبقية ب 10 ملليلتر من 4٪ بارا فورمالدهايد.
بعد نضح PBS ، حافظ على الرئتين في 30 ملليلتر من محلول شبه فورمالدهايد. بعد 72 ساعة ، اغمر الرئتين في المثبت المحضر وضعه في حمام مائي بالموجات فوق الصوتية. خفف عند 40 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
بعد ذلك ، قم بإجراء الجفاف عن طريق وضع الأنسجة في 75٪إيثانول ، ثم في 95٪ إيثانول ، ثم في إيثانول لا مائي لمدة 50 دقيقة لكل منهما. اغمر أنسجة الرئة في الزيلين لمدة 50 دقيقة مرتين لغسل المنديل. ضع المنديل في شمع البارافين المذاب لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات عند 55 إلى 60 درجة مئوية.
بمجرد أن يصلب الشمع ، استخدم آلة التقسيم للحصول على شرائح الرئة بسمك أربعة إلى خمسة ميكرومتر. سخني المقاطع عند 45 درجة مئوية في ماء فائق النقاء. ضع أقسام الرئة على شريحة مجهر ملتصقة بمجرد ذوبان الشمع.
أظهرت دراسات تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوزين أن الفئران المعرضة للنيكوتين مع السيليكا لديها تلف رئوي أكثر حدة من تلك التي تعرضت للنيكوتين أو السيليكا وحدها. كشف تلطيخ ماسون عن زيادة ترسب ألياف الكولاجين في الرئتين المعرضتين لمزيج السيليكا من النيكوتين مقارنة بالمجموعات الأخرى. تم تدمير الهياكل السنخية في الفئران المعرضة للسيليكا.
كشفت الدراسات المناعية الكيميائية عن زيادة CD اثنين صفر ستة بلاعم إيجابية والعامل المؤيد للتليف ، TGF بيتا واحد الخلايا الإيجابية في الفئران المعرضة لمزيج من النيكوتين والسيليكا. كان تعبير Vimentin أعلى في الفئران المعرضة للتعبير المزدوج بالنسبة للمجموعات الأخرى. تشير الدراسات الكيميائية المناعية والقياس الكمي للبروتين إلى تحول شديد في اللحمة المتوسطة الظهارية.
لضمان حقن النيكوتين بنجاح ، يجب أن يصبح المشغل على دراية بإمساك الفئران لأن الإمساك بالجلد في مؤخرة الرقبة قد يكون مؤلما بالنسبة لهم.
