שימוש בניקוטין במודל עכבר שנחשף לסיליקה לקידום מעבר אפיתל-מזנכימלי של הריאות

מודל העכבר המשמש במחקר זה מדמה ביעילות את ההשפעה של בליעת ניקוטין כרונית וחשיפה חוזרת ונשנית לסיליקה על פיברוזות ריאה באמצעות מעבר מזנכימלי אפיתל בבני אדם. מודל חלק המושבעים הושג על ידי הזרקה תת עורית של ניקוטין וטפטוף האף של סיליקה בצורה פשוטה ואמינה. להשהות סיליקה גבישית סטרילית במי מלח כדי להכין 20 מיליגרם לליטר השעיה.

נדנד אותו באמבט מים רועד קולי במשך 25 דקות. מניחים את מתלה הסיליקה עם מתנד מערבולת במשך שלוש דקות. שואפים את ההשעיה כדי לערבב אותו, ולאחר מכן להשתמש 50 מיקרוליטר עבור טפטוף האף.

כדי להתחיל חשיפה לסיליקה, ראשית, הניחו את העכבר המרדים על כף יד אחת וחשפו את חלל האף של העכבר. הזריקו 50 מיקרוליטר של תרחיף הסיליקה מנחיר אחד תוך ארבע עד שמונה שניות. כדי לאפשר חדירה מהירה של המתלים, לחץ בעדינות על חזהו של העכבר עם האצבע המורה למשך שלוש עד חמש שניות, חזור על הלחיצה שלוש עד חמש פעמים בכל שנייה כדי לשמור על קצב הנשימה שלו.

ברגע שהעכבר מפגין נשימה אחידה, הניחו אותו תחת השגחה בכלוב למשך שלוש דקות. מכינים מזרקי ניקוטין על ידי שאיבת אוויר עד לסימן של 0.2 מיליליטר לתוך מזרק של מיליליטר אחד. לאחר מכן, לצייר 125 מיקרוליטר של ניקוטין.

הקש על המזרק כדי למלא את המחט ואת הקצה הקדמי בניקוטין, ולאחר מכן הנח אותו במגש מוגן מפני אור. ביד ימין, אחוז בזנב העכבר. כאשר העכבר נרגע, השתמש באגודל ובאצבע שמאל כדי להפעיל לחץ מתון על העור מהזנב ועד קצה האוזן.

כעת, שחררו את יד ימין והשתמשו באצבעות השמאליות, הקטנות והקמיצה כדי לצבוט את הזנב והגפיים האחוריות כדי לשתק את העכבר. החזיקו את מזרק ההזרקה ביד ימין ונקבו את העור בעורפו בכיוון ראש לזנב. הזריקו את הניקוטין בקצב אחיד.

תקנו את העכבר המורדם על צלחת בדיקת קצף ורססו את הפרווה ב-75% אלכוהול. בצע חתך לאורך קו האמצע של הבטן החושף את חלל החזה. בצע חתך קטן בקודקוד הצד הימני של הלב.

יש להזריק 20 מיליליטר של PBS מקורר מראש לאט ובאופן אחיד מקודקוד הלב השמאלי, מה שגורם לדם לזרום החוצה מהפתח שנוצר בקודקוד הלב הימני. מוציאים את כל אונת הריאה ומקררים אותה במינוס 80 מעלות צלזיוס. לערבב את העכברים הנותרים עם 10 מיליליטר של 4% para-formaldehyde.

לאחר זילוח PBS, לשמר את הריאות ב 30 מיליליטר של תמיסת para-formaldehyde. לאחר 72 שעות, לטבול את הריאות קיבוע מוכן ומניחים אותם באמבט מים קולי. מזג ב 40 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.

לאחר מכן, לבצע התייבשות על ידי הצבת הרקמה 75% אתנול, ולאחר מכן 95% אתנול, ולאחר מכן אתנול נטול מים במשך 50 דקות כל אחד. לטבול את רקמת הריאה ב xylene במשך 50 דקות פעמיים כדי לשטוף את הרקמה. מניחים את הרקמה בשעוות פרפין מומסת למשך שעתיים-שלוש בחום של 55 עד 60 מעלות צלזיוס.

לאחר שהשעווה התקשה, השתמש במכונת חתך כדי לקבל את פרוסות הריאה בעובי ארבעה עד חמישה מיקרומטר. מחממים את המקטעים ב-45 מעלות צלזיוס במים טהורים במיוחד. הניחו את חלקי הריאה על מגלשת מיקרוסקופ דבק ברגע שהשעווה נמסה.

מחקרי צביעת המטוקסילין ואאוזין הראו כי עכברים שנחשפו לניקוטין בשילוב עם סיליקה סבלו מנזק ריאתי חמור יותר באופן משמעותי מאלה שנחשפו לניקוטין או לסיליקה בלבד. הצביעה של מאסון חשפה שקיעת סיבי קולגן מוגברת בריאות שנחשפו לשילוב ניקוטין סיליקה ביחס לקבוצות האחרות. מבנים מכתשית נהרסו בעכברים שנחשפו לסיליקה.

מחקרים אימונוהיסטוכימיים גילו עלייה ב- CD 2 אפס שישה מקרופאגים חיוביים ובגורם הפרו-פיברוטי, TGF בטא תא חיובי אחד בעכברים שנחשפו לשילוב של ניקוטין וסיליקה. ביטוי וימנטין היה גבוה יותר בעכברים שנחשפו לביטוי הכפול ביחס לקבוצות האחרות. מחקרים אימונוהיסטוכימיים וכימות חלבונים מצביעים על טרנספורמציה מזנכימלית אפיתל חמורה.

כדי להבטיח הזרקת ניקוטין מוצלחת, על המפעיל להכיר את תפיסת העכברים שכן אחיזת העור בעורפו עלולה להכאיב להם.