يتضمن نطاق بحثنا تطوير والتحقق من صحة طريقة غير جراحية لقياس محتوى الكربون في البلاعم في مجرى الهواء كمؤشر حيوي للتعرض للجسيمات المحتوية على الكربون. نهدف إلى تحديد دقة وموثوقية هذه الطريقة لتقييمات التعرض الفردية على نطاق واسع. يوفر بروتوكولنا طريقة غير جراحية ودقيقة وموحدة لقياس محتوى الكربون في البلاعم في مجرى الهواء.
كمؤشر حيوي للتعرض الداخلي ، يعد هذا التعرض الفردي بشكل فعال ودقيق للجسيمات المحتوية على الكربون. يوفر بروتوكولنا مؤشرا حيويا موثوقا به مباشرة للتعرض الفردي للجسيمات المحتوية على الكربون. تسمح هذه الطريقة بالقياس الكمي على نطاق واسع باستخدام البلغم المستحث ، مما يعزز الدقة والموثوقية مقارنة بالتقنيات الأخرى.
ابدأ بجمع عينة بلغم سعة ملليلترتين في أنبوب طرد مركزي. ثم أضف 20 إلى 30 مل من محلول التثبيت المحضر إلى الأنبوب واخلط المحتويات جيدا. لتحضير المحلول الهضمي لتعليق الخلايا ، قم بإذابة 0.1 جرام من dithiothreitol في 100 مل من المحلول الملحي ، حسب الجرعة المطلوبة.
الآن، قم بالطرد المركزي للأنبوب الذي يحتوي على البلغم عند 1،998 جم لمدة 30 دقيقة عند أربع درجات مئوية. ثم تخلص من الطافف. أضف كمية متساوية من هضم البلغم إلى الرواسب.
دوامة ورج الخليط جيدا. بعد ذلك ، ضع الأنبوب في حمام مائي 37 درجة مئوية حتى التسييل الكامل. ثم قم بتصفية الخليط المسال باستخدام غشاء مرشح 70 ميكرومتر.
جهاز الطرد المركزي للمحلول المصفى عند 500 جم لمدة سبع دقائق عند أربع درجات مئوية. تخلص من المادة الطافية ، مع الحفاظ على ترسيب الخلية. الآن ، أعد تعليق ترسيب الخلية في مخزن فوسفات دوشين.
الطرد المركزي المحلول عند 500 جم لمدة سبع دقائق عند أربع درجات مئوية للحصول على راسب خلية نقية. لتحضير مسحة الخلايا ، أضف 200 إلى 600 ميكرولتر من محلول الفوسفات إلى رواسب الخلية واخلطه جيدا. ثم خذ 20 ميكرولترا من تعليق الخلية وقم بإنشاء مسحة خلية.
قم بإصلاح اللطاخة المجففة بمحلول تلطيخ متاح تجاريا لمدة 10 ثوان. بعد ذلك ، اغمر اللطاخة في محلول تلطيخ A لمدة ثماني ثوان. أثناء التلوين ، ارفع الشريحة برفق لأعلى ولأسفل ، ثم اشطف البقعة الزائدة بالماء الجاري.
لوحظت مجاميع صغيرة من جزيئات الكربون الأسود المرئية بوضوح داخل الخلايا ، متفاوتة في كمية جزيئات الكربون. للبدء ، قم بتصوير البلغم الملون ينزلق تحت المجهر. حدد بشكل عشوائي البلاعم الملطخة جيدا والسليمة شكليا والتقط صورها.
باستخدام برنامج ImageJ ، قم بقياس المقياس لتحويل البكسل بدقة. حدد قياس وانقر فوق تعيين المقياس. أدخل المسافة بالبكسل والطول الفعلي ووحدة الطول والميكرومتر.
ثم ضع علامة على الخيار العام. الآن ، حدد الخلايا بشكل غير منتظم وقم بإزالة الخلفية باستخدام التحديدات اليدوية. ضمن تحرير، حدد مسح من الخارج.
قياس المساحة الإجمالية للخلايا من خلال التحليل والقياس. اقطع النواة باستخدام Edit and Cut. لتحويل صورة التدرج الرمادي إلى أبيض وأسود.
انقر فوق الصورة والنوع و8 بت. لضبط قيمة التدرج الرمادي بناء على تلطيخ الخلية لحساب جزيئات الكربون بدقة، انتقل إلى صورة، واختر ضبط، وحد، وتطبيق. أخيرا ، انقر فوق تحليل وحدد القياس.
كان لدى عمال التعبئة والتغليف أسود الكربون نسبة كربون أعلى في البلاعم الهوائية من المجموعة الضابطة.
