组织特异性的伤害性和炎症介质的测量人体内生物活性测定

摘要

一个方法是为调解疼痛和炎症的生化物质的测量（在这里，实验发炎的皮肤）的相关组织网站的间质液样品在体内收集。

摘要

这在人体内生物活性，可用于研究人类的志愿者和患者身上。样品收集相关组织的网站，如通过无菌插入微透析导管（皮肤透析，德国埃尔兰根）皮肤。这个例子说明的是收集实验发炎的皮肤在人类志愿者的组织间液。可以结合其他实验测试样品的采集。例如，当地公布的生物化学和主观实验发炎的皮肤疼痛刺激的敏感性的同时评估提供了关键的生化行为的环节，以确定疼痛和炎症的生物标志物。机械洞察生活的人的机体检测允许特定组织底层的疼痛和/或炎症过程。该方法也适合于研究现有的或新的干预措施的有效性 - 目标的痛苦和/或炎症性疾病的治疗 - 如新的候选药物。本文将收集人类研究对象的实验发炎的患处皮肤组织间液微透析技术的使用提供了详细的说明。通常处理多重珠阵列，使体积小50微升样品化验100分析物免疫援助组织间液样本。

研究方案

诱导实验性炎症：

1. 第一度晒伤引起的非皮肤晒黑了一个校准，紫外线B的源（Saalmann万用表SBB的LT 499，Saalmann有限责任公司，禧福，德国）的援助大腿。晒伤是一个微透析实验开始前三次运用必要的紫外线光量，导致完成泛红裸露的皮肤，或3倍最小红斑剂量（MED）诱导24小时。 MED是在研究开始之前，每个主题确定。准确地传递是有保证的能源与紫外线米Grobel紫外线博士电子公司，埃特林根，德国（12室）。

导管置入和样品的采集：

1. 准备一个临时区域，无菌手套，无菌持针器，1 1CC露儿提示注射器的23计（G）的针，与一个30G针头1CC注射器，1％利多卡因酒精棉签，2x2的无菌纱布垫，微透析导管连接在一个结束了一道4厘米的23G针（皮肤透析，德国埃尔兰根），和1.5毫升Microcent收集管4μl蛋白酶抑制剂每100微升样品干冰解决方案（科学E，K，圣克拉拉，加利福尼亚。）。蛋白酶抑制剂的解决方案是每个制造商的使用蛋白酶抑制剂的鸡尾酒片（罗氏诊断有限公司，曼海姆，德国）的指令。
2. 准备在乳酸林格氏液1％的人血白蛋白的解决方案，并绘制成1CC露儿提示注射器，确保无气泡留在注射器。
3. 与注射器装入1％的人类白蛋白，丰富林格到安装到一个高精密输液泵（泵22，哈佛器械，南Natic​​k郡，马的摇篮（微透析多注射器机架，哈佛大学器械，南纳提克，马）乳酸解决方案）。请一定的推动注射器，输液泵的酒吧是充分的接触与注射器的柱塞。设置后确认，注射器的直径已准确进入到泵泵的速度。常用的输注速率范围为2至4μl/min。
4. 您计划将收集您的样品从定义的区域。当一个人为制造的发炎区域，如晒伤，如上所述，计划在晒伤的边缘插入导管取样。
5. 清洁在小面积病变的对面边缘，或网站，你打算用酒精，收集的样本。这些清洁领域将导管的插入和退出点。注入刚够利多卡因在这些网站内cutaneously（发白的皮肤上注射证明），以创造一个非常小的的气泡（最高为2mm）。注射这种皮内利多卡因数量有限的微透析导管的入口和出口点不应该改变的生物测定的结果，但确实使插入导管为研究对象的痛苦大大减少。
6. 使用无菌技术，援助附加23G针插入微透析导管，在探索的皮肤面积长度。插入的深度是在表皮和皮下组织之间的接口。光学插入足够的深度可以验证。由于针和连接的导管是向前发展的针头应引起一点点向上折叠的皮肤，以及一些皮肤发白。无出血发生。如果确实发生出血，这表明，针是位于更深的比预期的插入深度调整。一旦针头已通过皮肤的退出点推，1％白蛋白丰富的乳酸林格氏溶液冲洗导管，沿导管的长度，直到你看到的水滴。这是通过仔细插入微透析导管末端的注射器（23G针）的针尾，慢慢注入解决方案。
7. 冲洗后的导管针轻轻拉饲料附加导管通过皮肤。温柔的处理是必要的，因为导管直径小，因此脆弱。拉导管，直到它完全通过皮肤线程，即，基地规模较大的塑料管嵌入导管末端接触皮肤切入点。如上所述，几乎没有在该过程结束时的出血确认最佳的导管置入。
8. 将23G针头的注射器，输液泵机架上的尖端导管的末端。需小心，以避免穿刺针通过导管壁，这将导致潜在的泄漏。
9. 切断近端导管针。
10. 使用粉色¼英寸磁带，高度接近导管出口部位的皮肤准备1.5毫升Microcent收集管。放入收集管导管的尖端，让microdialysate收集。开始灌注泵在预定ř和间歇性检查，交付和收集量相匹配。情况下，卷不匹配，从皮肤侵入部位的泄漏应被排除在外（有时可以解决拔导管的一部分，这是到皮肤进入网站更加紧密地嵌入塑料管材）。另外，导管可能需要更换，如果交付和收集的卷不匹配。
11. 一旦完成采样，样品放置，直​​到存储干冰在-80 ° C。

讨论

微透析技术和多重免疫检测技术的结合使用，是一个宝贵的实时，人体内生物活性提供利益的组织的生化事件的洞察力。结合行为测试，如疼痛测试，该方法允许调解疼痛和炎症的生化物质之间复杂的相互作用研究。有前途的方法是1）确定组织特定的生物标志物介导的疼痛和炎症，2）提供到与周围组织的病变炎症和慢性疼痛的条件的病理机理的认识，以及3）探索镇痛/反hyperalgesic和抗炎行动新的候选药物和介入...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microdialysis catheter	Tool	Dermal Dialysis	NA
Pump 22	Tool	Harvard Apparatus	552219
Saalmann Multitester SBB LT 400	Tool	Saalmann GmbH	NA
RM-12 IP-65 Radiometer	Tool	Dr. Grobel UV Elektronik GmbH	82120000/81112100
Complete Proteinase Inhibitor	Reagent	Roche Group	11836145001
Microcent tube	Tool	E&K Scientific	380150-X
Albumin 5%	Reagent	ZLB Behring	NA
Lactated Ringer	Reagent	Hospira Inc.	NA
Xylocaine-MPF	Other	AstraZeneca	NA
Syringe 1mL	Tool	BD Biosciences	309602