Nociceptive 및 염증성 중재자의 조직 특정 측정을위한 인간 - VIVO의 Bioassay

요약

기술은 통증과 염증을 중재 biochemicals의 측정을위한 관련 조직 사이트 (여기서, 실험적으로 염증 피부)에서 중간 액체 샘플에서 - 생체내 수집 제공됩니다.

초록

이 - 생체내 인간 bioassay 인간 자원 봉사자와 환자를 공부하는 데 사용할 수 있습니다. 샘플은 같은 무균 삽입 microdialysis의 카테터 (피부 투석, 에를랑겐, 독일)를 통해 피부와 같은 조직 관련 사이트에서 수집하고 있습니다. 이 예제에서 설명된 인간 자원 봉사자에 실험적으로 염증이 피부의 침입형 유체의 컬렉션입니다. 샘플 수집은 다른 실험 테스트와 함께하실 수 있습니다. 예를 들어, 로컬 출시 biochemicals 및 실험적으로 염증이 피부에 아픈 자극에 주관적인 감성의 동시 평가는 통증과 염증의 생체를 식별하는 중요한 생화학 - 행동 링크를 제공합니다. 살아있는 인간 유기체로 표시 분석 고통 및 / 또는 염증을 기본 조직을 특정 프로세스에 기계론의 통찰력을 허용합니다. 이러한 신약 후보로 - - 통증 및 / 또는 염증성 조건의 치료를 타겟팅하는 방법은 또 기존 또는 소설 개입의 효과를 조사하기 위해 적합합니다. 이 문서는 인간의 학습 과목의 실험적 염증 피부 병변에서 중간 액체를 수집하기 위해 microdialysis 기법의 사용에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 중간 유체 샘플은 일반적으로 50 microliters으로 볼륨에서와 같이 작은 샘플 100 analytes까지 시금 수 있도록 멀티 플렉스 비드 어레이 immunoassays의 도움으로 처리됩니다.

프로토콜

실험 염증의 유도 :

1. 첫 학위 햇볕은 보정, 자외선 B 소스 (Saalmann Multitester SBB LT 499, Saalmann GmbH를, 헤리퍼드, 독일)의 도움을 허벅지의 비 빠져있었단 피부에 유도합니다. 햇볕에 노출이 피부의 완전한 붉어지는 것, 또는 세 번 최소한의 선용 복용량 (MED)을 원인 UVB의 빛의 양을 필요로 세 번 적용하여 microdialysis 실험을 시작하기 전에 24 시간 유도합니다. MED는 연구 개시 전에 각 과목에서 결정됩니다. 에너지의 정확한 전달이 함께 보장되는 UV - m (RM 12, 박사 Grobel UV - 전자 GmbH를, Ettlingen, 독일).

카테 테르 배치 및 샘플 컬렉션

1. 멸균 장갑, 23 게이지 (G) 바늘, 30G의 바늘로 1cc 주사기, 1 % lidocaine 1 무균 바늘 홀더, 1cc luer 팁 주사기와 준비 영역 준비, 알코올 면봉, 2x2 멸균 거즈 패드, microdialysis의 카테터는 하나 첨부 4cm 23G 바늘 (피부 투석, 에를랑겐, 독일), 그리고 드라이 아이스에 100μl 샘플 당 4μl 테아제 억제제 솔루션 1.5 ML Microcent 수집 튜브 (E & K 과학적, 산타 클라라, CA.) 최종. 프로 테아제 억제제 솔루션은 테아제 억제제 칵테일의 타블렛을 (로체 진단, GmbH를, 만하임, 독일)를 사용하여 제조 업체의 지시마다 이루어집니다.
2. lactated 링어의 용액에 1 %의 인간 알부민 솔루션을 준비하고 1cc luer 팁 주사기로 그려, 주사기에 남아 기포가가 없는지 만들기.
3. 고정밀 주입 펌프 (펌프 22, 하버드 장치, 사우스 내틱, MA에 장착 크래들 (microdialysis 멀티 주사기 랙, 하버드 장치, 사우스 내틱, MA)에 1% 인간 알부민 - 풍부한 대타의 락트 솔루션 주사기로드 ). 주사기를 운전 주입 펌프의 막대가 주사기의 플런저와 함께 전체 접촉에 있는지 확인하십시오. 주사기의 직경이 정확 펌프에 입력되었는지 확인 후 펌프 속도를 설정합니다. 일반적으로 사용되는 주입 속도는 2 사이 4μl/min까지 다양합니다.
4. 당신이에서 샘플을 수집하려는 영역을 정의합니다. 같은 햇볕 위에서 설명한, 햇볕의 가장자리에 카테터를 삽입 계획으로 인위적으로 만들어 염증 지역에서 샘플링 때.
5. 당신은 알코올에서 샘플을 수집하고자하는 작은 병변의 반대편 가장자리 영역 또는 사이트를 청소합니다. 이 청소 구역은 카테터를위한 목적으로 삽입하고 종료 지점 것입니다. 충분히 내부 cutaneously lidocaine 주입 (주입에있는 피부의 창백에 의해 입증)이 사이트에서 아주 작은 물집을 (2mm 최대) 만들 수 있습니다. microdialysis의 카테터의 입구와 출구 지점에서 내부 피부 lidocaine 이러한 한계의 주입은 bioassay 결과를 변경하지 말아야하지만, 학습 과목 훨씬 덜 괴롭 카테터의 삽입을 않습니다.
6. 무균 기법을 사용하여 탐구 피부 영역의 길이를 통해 첨부 23G 바늘의 도움으로 microdialysis의 카테터를 삽입합니다. 삽입의 깊이가 커티스와 subcutis 사이의 인터페이스에 있습니다. 적절한 깊이에 삽입 광학 확인할 수 있습니다. 바늘과 연결된 카테터가 앞으로 이동으로 바늘은 피부뿐만 아니라 피부의 일부 창백 약간 상향 폴딩을 일으킬 것입니다. 아무도 출혈이 발생해서는 안됩니다. 출혈이 발생하는 경우 이것은 바늘이 깊이 예정보다 있으며 삽입의 깊이가 조정할 수있다는 것을 나타냅니다. 바늘이 피부의 출구 지점을 통해 밀고있다 일단 당신이 카테 테르의 길이를 따라 방울을 볼 때까지, 1 % 알부민 풍부한 대타의 락트 솔루션 카테터를 플러시. 이것은주의 깊게 microdialysis의 카테터의 말초 끝에 주사기 (23G 바늘)의 바늘 끝을 삽입하고, 천천히 솔루션을 주사하여 이루어집니다.
7. 플러싱 후 카테터가 피부를 통해 연결된 카테터 먹이를 바늘에 부드럽게 당기십시오. 카테터는 작은 직경, 그리고 결과적으로되기 때문에 젠틀 처리가 필요합니다. 그것이 완전히 피부를 통해 스레드 때까지 카테터를 당겨 즉, 카테터의 말초 끝을 포함 큰 플라스틱 튜브의 기본은 진입 점에서 피부를 접​​촉. 위에서 언급한 바와 같이 프로 시저의 끝 부분에 출혈은 거의 최적의 카테 테르의 위치를​​ 확인합니다.
8. 주입 펌프의 선반에 휴식 주사기의 23G 바늘 끝에 카테터의 말초 끝을 연결합니다. 관리는 카테터의 벽을 통해 바늘을 펑쳐링 피하기 위해 필요합니다, 이것은 잠재적인 누수의 원인 것입니다.
9. 카테 테르의 근위 끝에서 바늘을 잘라요.
10. ¼ 인치 핑크색 테이프를 사용하여 카테터의 출구 사이트에 가까운 피부에있는 준비 1.5ml Microcent 수집 튜브를 연결합니다. microdialysate의 수집을 허용하도록 컬렉션 관에 카테 테르의 끝에 놓습니다. 예정된 R에서 재관류 펌프를 시작합니다먹고 간헐적으로 그 전달과 수집 량이 일치 확인합니다. 경우에는 볼륨은 피부 항목 사이트에서 누설 (때로는 더 단단히 피부 항목 사이트에 플라스틱 튜브가 내장된 카테터의 일부를 당기는 해결할 수 있습니다) 제외되어야를 일치하지 않습니다. 배달 및 수집 볼륨이 일치하지 않는 경우 또는 카테터를 교체해야 할 수도 있습니다.
11. 일단 샘플링이 완료되면 샘플은 -80 º C.에 보관까지 드라이 아이스에 표시됩니다

토론

microdialysis 기법과 멀티 플렉스 면역 분석법 기술의 결합 사용은 관심의 조직에 생화 학적 사건에 대한 통찰력을 제공하는 귀중한 실시간에 - 생체내 인간 bioassay입니다. 이러한 통증 시험으로 행동 검사와 결합, 방법은 통증과 염증을 중재 biochemicals의 복잡한 상호 작용을 연구하고 있습니다. 방법은 주변 조직 병리학과 염증과 만성 통증 조건의 병리에 기계론의 통찰력을 제공 통증과 염증, 2) 중재 조직 구체적인...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microdialysis catheter	Tool	Dermal Dialysis	NA
Pump 22	Tool	Harvard Apparatus	552219
Saalmann Multitester SBB LT 400	Tool	Saalmann GmbH	NA
RM-12 IP-65 Radiometer	Tool	Dr. Grobel UV Elektronik GmbH	82120000/81112100
Complete Proteinase Inhibitor	Reagent	Roche Group	11836145001
Microcent tube	Tool	E&K Scientific	380150-X
Albumin 5%	Reagent	ZLB Behring	NA
Lactated Ringer	Reagent	Hospira Inc.	NA
Xylocaine-MPF	Other	AstraZeneca	NA
Syringe 1mL	Tool	BD Biosciences	309602