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Method Article
胚胎生殖细胞分化成原始生殖细胞在早期发展阶段的能力,是一个完美的模型,以解决我们的假设,对癌症和不育症。该协议显示了如何从发展中国家性腺的原始生殖细胞中分离出来后10.5-11.5天coitum小鼠胚胎。
胚胎生殖细胞的能力(例如),以区分在早期发育阶段,是一个完美的模型,以解决我们的假设,对癌症和不育症的原始生殖细胞(PGCS),后来进入配子。该协议显示了如何在10.5-11.5天coitum(DPC)的小鼠胚胎来自发展中国家性腺的原始生殖细胞分离。发展中国家从小鼠胚胎性腺脊(C57BL6J)分离机械破碎与胶原酶,然后镀上了一个小鼠胚胎成纤维细胞饲养层(MEF - CF1)以前分裂与丝裂霉素C灭活淘汰赛媒体的存在,并辅以白血病抑制,因子(LIF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),干细胞因子(SCF)。使用这些优化方法盈科鉴定,隔离,并建立培养条件允许超过40天,EG细胞的长期培养。胚胎生发细胞株显示胚胎的表型多能状态的常用标记和表达。文化的生发细胞的分离和衍生提供了一个工具,以了解体外他们的发展提供了机会,在遗传和表观遗传一级监察累积损伤后接触氧化应激。
第1部分:孕鼠剖腹
第2部分:性腺岭夹层
在体视显微镜和光源肖特Fostec
第3部分:性腺岭消化
在体视显微镜:
第4部分:元文化的生殖细胞
“你应该迅速执行下一个步骤,以维护隔离和推导PGCS的可行性。
第5部分:胚胎生殖细胞
注释
结论
我们已经提供了一个视频将告诉您,如何隔离,推导,文化10.5-11.5 DPC小鼠胚胎性腺脊的胚胎生殖细胞。胚胎生发细胞系的重现性隔离和长期的文化,提供了一个研究早期胚胎发育,遗传和表观遗传的生发模式,性腺形成的关键基础,在配子发生在男性和女性胚胎发育过程中,周围脏器的环境影响确定的途径,导致癌症和不育症。
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作者想承认了宝贵的帮助:尼尔第一手稿的编辑和Kourtney威尔金森博士;露西信通博士,博士Brigit Willeford和迈克Basett在密歇根州立大学ALAC的认可鼠标设施,培训和动物服务的援助;德韦恩明智博士为他的援助显微镜和图像采集;塞萨尔蒙罗伊,汉娜Swoope,协助他们在密歇根州立大学与视频生产和Bobbie赫德尔斯顿。这项研究是由研究机构和密西西比州立大学生物科学系办公室。
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钳第14号和15日,手术刀35毫米,解剖剪刀,手术领域,抗菌肥皂,盐水0.9%,纱布,冰泡沫容器,刀片,手术刀35毫米,4号和5级罚款钳,细戏弄针处理,过滤纸,然后在拉玻璃吸液管。
设备:解剖立体显微镜,光源肖特Fostec,倒置显微镜,微量移液器10和200ul,离心机,生物安全柜。
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