JoVE Logo
发表
联系我们

登录

需要订阅 JoVE 才能查看此. 登录或开始免费试用。

本文内容

  • 摘要
  • 摘要
  • 引言
  • 研究方案
  • 结果
  • 讨论
  • 披露声明
  • 致谢
  • 材料
  • 参考文献
  • 转载和许可

摘要

利用花浸法进行农杆菌介导的转化, 可以成功地利用这种方法, 创造出稳定的极端植物模型schrenkiella parvula的转基因线。考虑到不同的生长习性和四肢的生理特性, 我们提出了一种从这种方法中修改的方案。

摘要

夏氏叶炎是一种适应各种非生物胁迫的极端植物, 包括多重离子毒性胁迫。尽管有高质量的基因组资源可用于研究植物如何适应环境压力, 但由于缺乏可行的转化系统, 其作为功能基因组学模型和工具的价值受到限制。在这个协议中, 我们报告如何产生稳定的转基因s.类似线使用农杆菌介导的花浸法。我们修改了用于罗非鱼的转化协议, 以考虑到罗非鱼的独特特征, 如不确定的开花习惯和高表观蜡含量的叶子。简单地说, 在种植前,将其在4°c 下分层5天。植物生长在14小时的光和10小时黑暗的光周期和 130μmol m-2-1 的光强, 在 22°c 至24°c。选择了8至9个具有多个花序的周龄植物进行改造。这些花序被浸入携带 mp90rk质粒的农杆菌 gv3101 的浸润溶液中。我们在三到四周的时间间隔内进行了两轮插花, 以提高转化效率。t1 种子在萌发前在容器中收集并干燥四周, 以筛选出候选转化线。对 basta 的抗性被用来筛选 t1 植物。我们在两个为期一周的工厂喷洒了三次基本服务溶液, 间隔为三天, 以减少假阳性。对存活的单个植物进行了基本程度的空投试验, 以确定真正的阳性转化物。转化效率为 0.033, 每繁殖 10, 000 种 t1 种子产生3-4 个转基因植株。

引言

在这个协议中, 我们描述了生长和建立稳定的转基因线的极端植物模型雪伦基耶拉帕维拉。有效的转化系统的可用性是任何多功能遗传模型的标志。在极端环境中茁壮成长的植物, 被称为极端植物, 为了解植物对环境压力的适应提供了重要资源。施伦基耶拉·帕弗拉(原thellungiella parvula和eutrema parvula) 就是这样一种极端植物模型, 具有不断扩展的基因组资源1,2, 3,4, 5.然而, 在已发表的研究中, 还没有报道 s . parvula 的转化协议。

帕拉维的基因组是布拉西卡科 (芥末科) 首次公布的极生植物基因组, 并与非极生植物模型拟南芥1进行了广泛的整体基因组联合。因此,对塔利亚纳和阴道的比较研究可以受益于在塔利亚纳进行的大量基因研究, 以便对阴道基因组是如何进化和调控的做出信息性假设以应对极端环境压力5,6,7。在已知的野生亲缘植物中,黄花是最耐盐的物种之一 (基于土壤 ncl ld50)。除了氯化钠耐受性外, 在高浓度对大多数植物有毒的情况下, s. parvula还存活并完成其生命周期.为了应对其自然栖息地普遍存在的非生物胁迫, 它进化了各种性状, 其中一些已在生化或生理水平8,9,10, 11个。

自2010年以来, 有400多种同行更新的出版物将s. parvula作为目标物种, 或将其用于与其他植物基因组的比较。然而, 通过更仔细地研究已经进行了哪些类型的研究, 可以确定一个明显的瓶颈。这些报告大多讨论了在未来研究中的潜在用途, 或将其用于比较基因组或系统学研究。由于没有为s. parvula制定概念验证转换协议, 尽管迄今为止已将最高质量的植物基因组之一组装和组装, 但该协议尚未用于功能基因组研究。注释成染色体级的假分子1。

农杆菌介导的花浸转化方法已成为在塔利亚纳中最广泛使用的产生植物基因的方法, 开发可复制的转化系统是其成功的关键因素。遗传模型12,13。然而, 并非所有的布拉西卡科物种都已被证明是成功地转化使用了为a.thaliana 开发的花浸法。特别是包括白斑的 Brassicaceae 系 ii 种一直对以植物浸渍为基础的转化方法14,15。

由于罗非鱼开花习性不确定, 加上叶片形态狭窄, 采用标准农杆菌介导的花浸转化方法具有挑战性。在这项研究中, 我们报告了我们为s. parvula的可重复转化而开发的修改后的协议。

研究方案

1. 植物生长

  1. 种子灭菌 (可选)
    1. 在双蒸馏水 (ddh2o)中制备50% 的漂白剂, 在50毫升管中制备1或2滴非离子洗涤剂 (见材料表)。将管反转多次, 混合溶液。
      请注意:最好在具有紫外线灭菌表面的层流柜中进行种子灭菌15分钟。
    2. 在 1.5 ml 管中加入漂白剂溶液, 加入 ~ 100–200 s. parvula 种子。充分混合, 让管坐5分钟。
    3. 从试管中取出漂白剂, 加入70% 的乙醇。用移液多次清洗种子, 然后立即取出乙醇溶液。
    4. 将种子在灭菌水中清洗, 去除多余的漂白剂和乙醇, 然后将水分取出。重复此步骤5至6次。
  2. 种子分层
    1. 将种子浸泡在灭菌水中, 并在4°c 下存放5至7天。或者, 直接在潮湿的土壤上播种未消毒的干燥种子, 并在4°c 下放置土壤托盘5至7天。
  3. 正在准备转化的植物
    1. 将土壤混合物 (见材料表) 填充到 7 x6厘米2罐中, 将锅浸泡在水中, 并从顶部喷水, 以确保均匀的湿生长介质。在每个锅的土壤表面加入5–肥料珠 (见材料表)。
      请注意:就我们所经历的情况而言, 在任何可以生长的土壤混合物上, 都生长得很好。
    2. 使用湿牙签, 在土壤表面上每罐转移 20 ~ 25个种子。
      请注意:一个方便的做法是把一批4-5 种子在四个角落和锅的中心 (图 1, 第15天, 左面板)。
    3. 在锅盘上盖上一个透明的圆顶, 使种子在高湿度下发芽。
    4. 将植物托盘放在生长室中, 其光强设置为 130μmol m-2-秒-1光、22-24°c 温度和每天 14小时/每晚10小时.发芽后7-10天取出圆顶。加入托盘底部的水, 使土壤均匀地湿润在理想的水平。
    5. 除草额外的幼苗, 并留下只有4-5 健康的幼苗, 每个锅很好地分离之间 (图 1, 第15天, 右面板)。
    6. 每两天轻轻给植物浇水, 每两周用0.2x 霍格兰的解决方案16一次施肥.
      请注意:保持土壤水分在均匀水平是持续健康地生长的关键。
    7. 继续种植植物 8-10周, 直到每个植物产生100–150个花蕾 (图 1, 第60-80 天)。在计划的天为花浸为基础的变革 (步 4.5), 从植物中去除所有成熟和开发的 siliques。

2. 将感兴趣的基因组元素克隆为植物转化的载体

  1. 根据试剂盒协议或使用琼脂糖凝胶纯化 dna 的任何其他适当方法, 使用聚合酶链反应 (pcr) 17 扩增目标 dna 片段, 并使用凝胶提取试剂盒 (见材料表)分离 pcr 产品电泳17,18。通过 sanger 测序19验证分离后的 pcr 产物的序列。
  2. 按照制造商的指导, 将所需的 pcr 产品克隆到克隆载体中, 并按照制造商的准则, 使用基于拓扑体的克隆试剂盒 (见材料表) 将克隆的结构转化为合格的大肠杆菌细胞。
  3. 用适当的抗生素 ( 如50μgl/ml 亚太区霉素), 在 luria-bertani 20 (lb) 琼脂细菌生长介质 (表 1) 上传播50μl 转化后的产品, 并在37°孵育c 一夜。
  4. 第二天, 选择5-10 个单一菌落, 用适当的抗生素接种液体 lb 培养基, 并在37°c 下进行夜间温和晃动孵育。
  5. 使用质粒隔离试剂盒 (见材料表) 分离质粒, 并通过 sanger 测序19验证2.1 中放大的目标序列是否得到了正确的克隆。
  6. 使用重组酶酶混合试剂盒 (见材料表), 将克隆和验证的 pcr 产品转移到与基于重组的克隆兼容的植物转化目标载体 (见材料表), 以下内容套件制造商的说明。重复步骤2.3 到步骤 2.5, 分离并验证具有适当质粒结构的克隆。

3. 将植物转化为农杆菌的载体构造转化为农杆菌

  1. 将载体结构的质粒从2.6 转化为gv3101: mpm90rk 21 菌株, 该菌株含有用于染色体背景选择的利福平耐药基因。使用适当的抗生素, 例如庆大霉素或卡那霉素 (见材料表), 选择植物转化结构 (ti 质粒)。第3.2 节简要介绍了电穿孔转化a. 肿瘤的方法。
  2. 电穿孔法转化肿瘤
    1. 在冰上解冻有能力的细胞22 。将从2.6 中制备的质粒0.1–1μg 混合, 溶于1-2μl 的 ddh 2o,并在冰上培养良好的细胞。将混合物转移到电穿孔材料中 (见材料表)。
    2. 按照制造商的准则, 使用电孔 (见材料表), 对3.2.1 的质粒和合格细胞的混合物进行电穿孔。
      请注意:在开始电穿孔之前, 请先清洁杯的表面。
    3. 将反应混合物从试剂盒转移到含有 1.5 ml 液体 lb 的微离心管中, 在28°c 下与移液混合良好, 在28°c 下孵育 1小时, 轻轻晃动。
  3. 接种转化后的a.在含有适当选择抗生素的 lb 板上, 从第3.2 节中提取的肿瘤 (例如, 卡那霉素25μg/ml、亚太区霉素50μg/ml、庆大霉素25μg/ml 和利福平 50μg/ml), 并在28°c 下孵育3天。

4. 农杆菌介导的阴道的转化

  1. 在无菌50毫升锥形管中, 将从板材转化为含有抗生素的 lb 液体介质的单转化菌落接种 (与3.3 中相同) 的10毫升 (见材料表)。在28°c 的下午 250 r. 时, 在晃动的孵化器中孵育 24小时 (见材料表)。
  2. 将细菌溶液从3.4.1 转移到无菌250毫升的烧瓶中, 用适当的抗生素加入40毫升的 lb 液体介质, 孵育 12小时, 直到600纳米波长 (od600) 的光学密度达到2.0 左右。
  3. 以 3, 100 x g 的离心剂, 在40毫升的肿瘤浸润液中去除上清液并重新悬浮细菌培养 (表 1) .
  4. 用渗透溶液稀释重新悬浮的 a. 肿瘤,使其最后的 od600为0.8。将25μl 表面活性剂溶液 (表 1) 加入50毫升的稀释的肿瘤溶液中, 通过多次倒置进行混合。
  5. 将植物的花序浸入在第4.4 节中制备的20 s 中制备的 a. tumefaciens 溶液中, 在从六个锅中浸出花序后, 使用新鲜的细菌溶液。确保所有的花都与溶液接触。如果不能浸入溶液中, 将细菌溶液直接输送到位于花序下部的花上。
    请注意:对于第一轮的转变, 一定要用锋利的手术刀或小剪刀摘除所有成熟和发育中的。如果第二次执行转换, 请不要删除 siliques。

5. 改造后植物护理与二次改造

  1. 将花浸植物水平放置在带圆顶的干净托盘中, 以覆盖植物, 并放置在黑暗的生长室1-2天。
    请注意:在这一阶段, 保持鲜花在高湿度下很重要 (图 1, 改造后的植物)。
  2. 将植物恢复到直立的位置, 并将植物转移到生长室, 每晚10小时, 130 微米 m-2-1光强和22至24°c 的温度.
  3. 监测下一周内的浸渍花序。如果大量的花流产 (图 2), 重复花浸渍 (步骤 4) 后约4周或后, 大量的花已新开发。
    请注意:与第一个转换的准备步骤 (步骤 1.3.7) 不同, 不要在第二轮转换之前删除预先存在的或正在开发的 siliques (图 2)。
  4. 种植植物, 直到种子成熟, 收获种子在 ~ 21周。
  5. 干燥种子在室温下在一个密封的容器中, 盛满干燥剂 (见材料表)。

6. 阳性转化剂的选择

  1. 在步骤1.2 至1.3 中种植野生种子所描述的 t1 种子。
  2. 生长植物, 直到前两个真正的叶子发展, 大约10-14天后发芽。
  3. 执行第一个抗除草剂选择 (图 3a 和 3b), 详见下文。
    1. 稀释葡萄糖酸铵 (11.3) 除草剂 (或 basta) (表 1) 至 1:1000 (v/v)。在幼苗上喷洒稀释的 basta 溶液, 用圆顶覆盖一夜。
    2. 每5-7天重复一次 basta 喷洒2-3次。
  4. 使用 basta 放置测试执行第二个选择, 如下所述。
    1. 使用 basta 解决方案喷洒3-4 次后存活下来的植物。将植物再生长 2-3周, 直到3-5 叶形成相对较大的表面积。
    2. 选择每株最大的成熟叶片, 用手指轻轻摩擦叶子表面, 去除蜡层, 并放置一滴稀释的 basta 溶液 (从步骤 6.3.1)。
      请注意:通过在最近的茎上放置纸带, 标记应用于 basta 落差的叶子的位置。
    3. 监测应用的叶子与巴斯塔下降的迹象枯萎长达一个星期。选择叶子不受巴斯塔水滴影响的植物。
      请注意:大多数假阳性植物的叶子在两天内开始枯萎, 而来自真品的叶子即使在基本剂量溶液的滴干之后也会完生 (图 3c)。
  5. 使用基因组 pcr 确认阳性转化剂。
    1. 在6.4.5 的台阶上收集存活植物的2-3 片叶子。
    2. 使用 ctab 方法23或任何其他适当的 dna 提取方法从叶子中提取基因组 dna。
    3. 使用从目标植物、野生类型植物 (作为阴性对照) 和步骤3.1 中的质粒结构 (作为阳性对照) 提取的基因组 dna 样本进行 pcr。使用针对选择性标记基因的适当的一对 pcr 引物, 例如,对于耐巴塔标记基因 (bar)、tggggggggtaga (转发) 和 ggccacacacacacacaggaca (反向)。
      1. 例如, 针对棒状基因的 pcr 引物, 使用以下 pcr 条件: 在98°c 下的初始变性步骤为 30秒;其次是在98°c 下的变性周期为 30秒, 在59°c 下退火 30秒, 在72°c 下延长 30秒;在72°c 下的最后一次延长5分钟。
        请注意:为了确保整个 t-dna 的插入, 我们还建议使用选择性标记基因中的 pcr 引物和另一个特定于在步骤中克隆到植物转化载体的目标序列的 pcr 引物进行基因组 pcr
    4. 通过琼脂糖凝胶电泳17 (图 4 a) 的目标样品 (图 4a) 以及通过对分离的 pcr 产物19进行测序, 确认扩增棒pcr 产物的预期大小。步骤2.1 中的过程相同。

结果

我们开发了一个转化协议, 可以在150天内收获 t 0 种子, 使用的是从 a. thaliana的花浸法修改的方法.图 1显示了时间线和s. parvula 植物的摘要, 它们代表了通过花浸执行转换的最佳阶段。我们选择了在萌发后60-80天内具有70-80 朵花的植物作为转化的目标阶段。在这一阶段, 少量先前存在的开放或受精卵和花在植物浸润之前被花

讨论

植物的生理状态对转化效率有显著影响.利用健康而有活力的植物进行转化是成功转化的关键要求。与理想转化的健康植物相比, 水或光有压力的植物的花将更少 (图 1, 中心面板)。在低于 130μmol m-2 s-1 的光强下生长, 但植物往往更脆弱;这样的植物会导致更多的流产花后, 花浸水。帕鲁拉倾向于以高于塔利亚纳的速度...

披露声明

作者没有什么可透露的。

致谢

这项工作得到了国家科学基金会 mcb 1616827 奖的支持。

材料

NameCompanyCatalog NumberComments
AgarVWR International, Radnor, PA90000-762Bacto Agar Soldifying Agent, BD Diagnostics
B5 vitaminsSigma-Aldrich, St. Louis, MOG1019Gamborg’s Vitamin Solution
DesiccantW A Hammond Drierite, Xenia, OH22005Indicating DRIERITE 6 mesh
Destination vector for plant transformationTAIRVector:6531113857pKGWFS7
Electroporation cuvetteUSA Scientific9104-5050Electroporation cuvette, round cap, 0.2 cm gap
ElectroporatorBIO-RAD Laboratories, Hercules, CA1652100MicroPulser Electroporator
Fertilizer beadsOsmocote Garden, Marysville, OHN/AOsmocote Smart-Release Plant Food Flower & Vegetable
Gel extraction kitiNtRON Biotechnology, Boston, MA17289MEGAquick-spin Total fragment DNA purification kit
GentamicinSigma-Aldrich, St. Louis, MOG1914-5GGentamicin sulfate
Glufosinate-ammonium (11.3%) herbicide (BASTA)Bayer environmental science, Montvale, NJN/AFINALE herbicide
KanamycinVWR International, Radnor, PA200004-444Kanamycin monosulfate
MESBioworld, Dublin, OH41320024-2MES, Free Acid
MS saltMP Biomedicals, Santa Anna, CA092621822Hoagland's modified basal salt mixture
N6-benzylaminopurine (BA) Sigma-Aldrich, St. Louis, MOB32746-Benzylaminopurine solution
NaClSigma-AlrichS7653Sodium chloride
Non-ionic detergentSigma-Aldrich, St. Louis, MO9005-64-5TWEEN 20 
Plasmid isolation kitZymo Research, Irvine, CAD4036Zyppy Plasmid Kits
Recombinase enzyme mix kitLife Technology11791-020Gateway LR Clonase II Enzyme mix
RifampicinSigma-Aldrich, St. Louis, MOR3501-1GRifampicin, powder, ≥ 97% (HPLC)
Shaking incubatorThermoFisher Scientific, Waltham, MASHKE4450MaxQ 4450 Benchtop Orbital Shakers
Soil mixSun GroSUN239223328CFLPSun Gro Metro-Mix 360 Grower Mix
SpectinomycinVWR International, Radnor, PAIC15206705
Sterile 50 mL conical tubesUSA Scientific, Ocala, FL1500-181150 mL conical screw cap tubes, copolymer, racks, sterile
SucroseVWR International, Radnor, PA57-50-1Sucrose, ACS
Surfactant solutionLehle seeds, Round Rock, TXVIS-02Silwet L-77
Topoisomerase-based cloning kitLife Technologies, Carlsbad, CAK240020pENTR/D-TOPO Cloning Kit, with One Shot TOP10 Chemically Competent E. coli
TryptoneVWR International, Radnor, PA90000-282BD Bacto Tryptone, BD Biosciences
Yeast ExtractVWR International, Radnor, PA90000-722 BD Bacto Yeast Extract, BD Biosciences

参考文献

  1. Dassanayake, M., et al. The genome of the extremophile crucifer Thellungiella parvula. Nature Genetics. 43 (9), 913-918 (2011).
  2. Oh, D. -. H., Dassanayake, M., Bohnert, H. J., Cheeseman, J. M. Life at the extreme: lessons from the genome. Genome Biology. 13 (3), 241 (2012).
  3. Whited, J. The Next Top Models. Cell. 163 (1), 18-20 (2015).
  4. Dassanayake, M., Yun, D. O. D., Bressan, R. A., Cheeseman, J. M., Bohnert, J. H. The scope of things to come: New paradigms in biotechnology. Plant Biotechnology and Agriculture: Prospects for the 21st Century. , 19-34 (2009).
  5. Dittami, S. M., Tonon, T. Genomes of extremophile crucifers: New platforms for comparative genomics and beyond. Genome Biology. 13 (8), 166 (2012).
  6. Amtmann, A. Learning from evolution: Thellungiella generates new knowledge on essential and critical components of abiotic stress tolerance in plants. Molecular Plant. 2 (1), 3-12 (2009).
  7. Oh, D. -. H., Hong, H., Lee, S. Y., Yun, D. -. J., Bohnert, H. J., Dassanayake, M. Genome structures and transcriptomes signify niche adaptation for the multiple-ion-tolerant extremophyte Schrenkiella parvula. Plant Physiology. 164 (4), 2123-2138 (2014).
  8. Orsini, F., et al. A comparative study of salt tolerance parameters in 11 wild relatives of Arabidopsis thaliana. Journal of Experimental Botany. 61 (13), 3787-3798 (2010).
  9. Uzilday, B., Ozgur, R., Sekmen, A. H., Yildiztugay, E., Turkan, I. Changes in the alternative electron sinks and antioxidant defence in chloroplasts of the extreme halophyte Eutrema parvulum (Thellungiella parvula) under salinity. Annals of Botany. 115 (3), 449-463 (2015).
  10. Teusink, R. S., Rahman, M., Bressan, R. A., Jenks, M. A. Cuticular waxes on Arabidopsis thaliana close relatives Thellungiella halophila and Thellungiella parvula. International Journal of Plant Sciences. 163 (2), 309-315 (2002).
  11. Jarvis, D. E., Ryu, C. H., Beilstein, M. A., Schumaker, K. S. Distinct roles for SOS1 in the convergent evolution of salt tolerance in Eutrema salsugineum and Schrenkiella parvula. Molecular Biology and Evolution. 31 (8), 2094-2107 (2014).
  12. Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: A simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant Journal. 16 (6), 735-743 (1998).
  13. Koornneef, M., Meinke, D. The development of Arabidopsis as a model plant. Plant Journal. 61 (6), 909-921 (2010).
  14. Bai, J., Wu, F., Mao, Y., He, Y. In planta transformation of Brassica rapa and B. napus via vernalization-infiltration methods. Protocol Exchange. 10, 1028 (2013).
  15. Sparrow, P. A. C., Goldsack, C. M. P., Østergaard, L. Transformation technology in the Brassicaceae. Genetics and Genomics of the Brassicaceae. , 505-525 (2011).
  16. Hoagland, D. R., Arnon, D. I. The water-culture method for growing plants without soil. California Agricultural Experiment Station Circular. 347 (347), 1-32 (1950).
  17. Saiki, R., et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science. 239 (4839), 487-491 (1988).
  18. Sun, Y., Sriramajayam, K., Luo, D., Liao, D. J. A Quick, cost-free method of purification of dna fragments from agarose gel. Journal of Cancer. 3, 93-95 (2012).
  19. Sanger, F., Nicklen, S., Coulson, A. R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 74 (12), 5463-5467 (1977).
  20. Bertani, G. Studies on Lysogenesis I. The mode of phage liberation by lysogenic Eschericia coli. Journal of Bacteriolgy. 62 (3), 293-300 (1951).
  21. Koncz, C., Martini, N., Szabados, L., Hrouda, M., Bachmair, A., Schell, J. Specialized vectors for gene tagging and expression studies. Plant Molecular Biology Manual. , 53-74 (1994).
  22. Weigel, D., Glazebrook, J. Transformation of Agrobacterium using electroporation. Cold Spring Harbor Protocols. 2006 (30), (2006).
  23. Murray, M. G., Thompson, W. F. Rapid isolation of high molecular weight plant DNA. Nucleic Acids Research. 8 (19), 4321-4326 (1980).
  24. Inan, G. Salt cress. a halophyte and cryophyte Arabidopsis relative model system and its applicability to molecular genetic analyses of growth and development of extremophiles. Plant Physiol. 135 (3), 1718-1737 (2004).
  25. Ghedira, R., De Buck, S., Nolf, J., Depicker, A. The efficiency of Arabidopsis thaliana floral dip transformation is determined not only by the Agrobacterium strain used but also by the physiology and the ecotype of the dipped plant. Molecular Plant-Microbe Interactions. 26 (7), 823-832 (2013).
  26. Shaohong, F. U., Xianya, W. E. I., Yingze, N. I. U., Shixing, G. U. O. Transformation of Brassica napus with the method of floral-dip. Biotechnology: Genomics and Its Applications. , 45-49 (2005).
  27. Li, J., Tan, X., Zhu, F., Guo, J. A rapid and simple method for Brassica napus floral-dip transformation and selection of transgenic plantlets. International Journal of Biology. 2 (1), 127 (2010).
  28. Li, H. Q., Xu, J., Chen, L., Li, M. R. Establishment of an efficient Agrobacterium tumefaciens-mediated leaf disc transformation of Thellungiella halophila. Plant Cell Reports. 26 (10), 1785-1789 (2007).
  29. Wu, G., Rossidivito, G., Hu, T., Berlyand, Y., Poethig, R. S. Traffic lines: New tools for genetic analysis in Arabidopsis thaliana. Genetics. 200 (1), 35-45 (2015).

转载和许可

请求许可使用此 JoVE 文章的文本或图形

请求许可

探索更多文章

143

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

政策

使用条款

隐私

联系我们

向图书馆推荐

JoVE 新闻简报

科研

教育

发表

图书馆员

关于 JoVE

版权所属 © 2025 MyJoVE 公司版权所有，本公司不涉及任何医疗业务和医疗服务。