推拿操作以减少膝关节骨关节炎大鼠的炎症和软骨损失

摘要

我们提出了一种对石膏固定诱导的膝关节骨关节炎大鼠进行推拿操作的方案。根据初步结果，它表明该方法的功效依赖于减少炎症和软骨损失。

摘要

临床试验表明，推拿手法可有效治疗膝关节骨关节炎（KOA），同时需要进一步研究以发现其机制。因此，膝关节骨关节炎动物模型的操作至关重要。该协议为推拿对KOA大鼠的操作提供了标准过程，并对推拿对KOA的机制进行了初步探索。将按压揉捏操作法（一种推拿操作，是指按压和揉捏体表的特定区域）应用于大鼠膝关节周围的5个穴位。通过手指压力记录标准化操作的力和频率，并且在协议中详细描述了操作过程中大鼠的位置。手法的效果可以通过疼痛行为测试和滑膜和软骨的显微镜检查来测量。KOA大鼠的疼痛行为有显著改善。推拿组滑膜组织炎症浸润减少，肿瘤坏死因子（TNF）-α表达明显降低。与对照组相比，推拿组软骨细胞凋亡较少。本研究为推拿对KOA大鼠的操作提供了标准化的方案，并初步证明推拿的治疗效果可能与减少滑膜炎症和延迟软骨细胞凋亡有关。

引言

膝关节骨关节炎（KOA）是一种退行性疾病，主要表现为关节疼痛。纤维化、开裂、溃疡和关节软骨脱落是^{本病的主要原因}1。KOA患病率高，可能对患者的日常生活造成深远影响，严重者致残。在 45-84 岁的人群中，KOA 的患病率随着年龄的增长而增加，85 岁及以上人群的患病率为 15%，其中女性占优势 ^2,3。此外，KOA可能会给个人和社会带来严重的经济负担。一项调查显示，人均KOA的直接医疗保健费用高达8,858美元^±每年5,120美元4。随着社会老龄化，KOA已成为一个全球性的健康问题和重大的社会问题，也是科学研究的热点问题。

循证研究表明，推拿手法在治疗KOA⁵方面的有效性。推拿手法可以缓解KOA患者的疼痛并改善功能障碍，其机制与抗炎作用有关^6,7。学者发现，推拿操作有效抑制了炎症因子白细胞介素（IL）-β和5-羟色胺的表达，减缓了兔KOA模型⁸中关节软骨的退化。结果表明，推拿可促进病灶部位血液循环和代谢，有助于清除IL-1、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）....

研究方案

本研究通过了上海中医药大学附属岳阳市中西医结合医院实验动物伦理委员会（YYLAC-2022-166）的动物伦理评审。

1. 实验动物的制备和分组

1. 动物制备
   1. 在室温（18-21°C），湿度40%-50%，12小时：12小时昼夜节律交替下饲养10只健康的SPF SD雌性大鼠200-220克。严格按照动物伦理准则和准则的有关规定进行与疼痛有关的动物实验。
2. 动物分组
   1. 将大鼠随机分为推拿组和对照组。建模后用按压和揉捏操作治疗推拿组的大鼠21天。将对照组的大鼠放在同一个推拿房间内，并在推拿组接受治疗时同时将它们放入黑布袋中。

2. 动物建模

1. 麻醉动物
   1. 使用异氟醚进行气体麻醉。将大鼠放入诱导浓度为3%的诱导盒中。放下大鼠后摆动盒子，并在大鼠翻身时确认麻醉，不尝试返回俯卧位。
   2. 将大鼠从诱导盒中取出，并将其鼻子固定在麻醉面罩中。将异氟醚浓度调节至2%以维持麻醉。当大鼠在捏爪子时没有反应时确认麻醉。在大鼠身上涂抹眼膏以防止大鼠麻醉时干燥，因为眼睑不能闭合。
2. 建模方法²¹
   1. 使用剃须机去除右后....

讨论

本研究为KOA大鼠的推拿操作提供了方案。通过疼痛行为试验和组织形态学发现，将这一系列推拿手法应用于KOA大鼠可以减少滑膜炎症和软骨凋亡，可为KOA动物模型的推拿手法提供参考。

协议期间有几个关键程序。首先，选择适当的方法来诱导KOA模型很重要。诱导KOA模型的方法多种多样，包括关节腔内注射25、关节内手术²⁶、²⁷、关节制动法

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
absolute ethanol	Supelco	PHR1070	For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus	ahlborn	2450-1	For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody	Sigma-Aldrich	SAB4200669	For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta	abcam	ab283818	For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit	Solarbio	DA1010	For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials	Shanghai New Century	20000356	For model making
eosin	bioswamp	PAB180016	For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings	Suzhou Changxian Optoelectronic Technology	CX1003w	For Tuina manipulation
formic acid solution	Sigma-Aldrich	695076	For decalcification
H2O2	Sigma-Aldrich	386790-M	For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin	bioswamp	PAB180015	For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane	Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company	S10010533	For gas anesthesia
neutral resins	bioswamp	PAB180017	For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution	Sigma-Aldrich	100496	For histology
PBS	Sigma-Aldrich	P3813	For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus	IITC Life Science	/	For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage	WANDE	20150023	For model making
Proteinase K	Sigma-Aldrich	124568	For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody	Proteintech	60291-1-Ig	For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL	Servicebio	GDP1042	For HE stain IHC or TUNEL
Wax	Sigma-Aldrich	327204	For making specimen
xylene	Shanghai Sinopharm Group	100092	For making specimen