改良四支血管闭塞诱导的脑缺血性昏迷模型

摘要

该协议描述了使用改良的四支血管闭塞方法诱导脑缺血性昏迷模型的过程。

摘要

脑缺血引起的昏迷是脑缺血最严重的并发症。四支血管闭塞可以建立脑缺血性昏迷模型，用于疾病研究和药物开发。但常用的四支血管闭塞法主要是将电凝笔插入颈部后方第一颈椎的双侧翼状孔，对椎动脉进行电凝。这个过程存在电凝不完全、出血以及脑干和脊髓损伤的风险。手术后 24 小时，再麻醉的大鼠在颈部前进行颈动脉结扎术。两次手术使大鼠面临更高的感染风险并增加了实验期。在这项研究中，在单个外科手术中，使用颈椎前切口来定位椎动脉穿透第一颈椎的关键部位。双侧椎动脉在视觉条件下进行电灼化，而双侧颈总动脉分离以放置松散的结。当大鼠的四肢开始抽搐时，双侧颈总动脉被迅速结扎以诱发缺血性昏迷。这种方法可以避免两次外科手术引起的感染风险，并且操作简单，成功率高，为相关从业者提供有用的参考。

引言

缺血性脑损伤是临床实践中最常见的脑损伤，约占脑血管疾病病例的 75%。缺血可导致严重的继发性脑损伤和疾病 ^1,2，^昏迷是缺血性缺氧性脑损伤引起的最严重症状。它也是许多危急情况的最终途径³。昏迷在临床实践中是一种难以控制的危重疾病⁴。昏迷持续时间越长，潜在危险就越大。迅速觉醒是防止病情恶化和进展的主要目标。虽然纳洛酮注射液在促进觉醒方面有广泛的临床应用，但它仍然存在一些副作用⁵。因此，开发安全有效的促进觉醒药物是一个亟待解决的问题。建立简单易操作的脑缺血性昏迷模型对于阐明缺血性昏迷的发病机制和药物开发至关重要 ^6,7,8。

本研究的目的是介绍一种通过双侧椎动脉电凝和双侧颈总动脉 （CCA） 临时结扎诱导全面缺血性昏迷的模型，该模型简单且对新手友好。之前的方案包括在第一次手术中暴露第一颈椎后椎的双侧翼状孔，并电烧翼状孔以阻断双侧 VA。24 小时后进行第二次手术，通过结扎....

研究方案

实验方案是根据佛山大学实验动物使用和机构动物护理和使用委员会的要求进行的（记录编号：2023-643656）。雄性 Sprague Dawley （SD） 大鼠 （200 g ± 20 g，6-8 周龄） 用于本研究。所有动物研究数据均已根据 ARRIVE（动物研究：体内实验报告）指南编写。材料 表中列出了研究中使用的试剂和设备的详细信息。

1. 植入脑电图电极

1. 麻醉前15 min皮下注射0.05mg/kg阿托品，防止分泌物引起呼吸阻塞和窒息。肌肉注射 20 mg/kg zoletil 和 5 mg/kg 甲苯噻嗪以麻醉大鼠¹⁴。用镊子夹住大鼠的脚趾，确认深度麻醉。
2. 用剃须刀去除老鼠头上的毛发。使用非穿透式耳杆将大鼠的头部固定在大脑立体定位装置上。使用无菌棉球将乙醇和聚维酮碘涂抹在手术部位 3 次，对皮肤进行消毒。
3. 用手术刀片沿着斩首的缝合线切开大鼠头部的皮肤。去除覆盖颅骨的肌肉，完全暴露颅骨。在整个过程中使用无菌棉签止血。
4. 用洗耳球吹干颅骨表面，以帮助牙科粘接剂紧紧粘附在颅骨上。用黑色记号笔标记颅骨钉的安装位置（直径 1.2 毫米，长度 3 毫米）（图 1....

讨论

四支血管闭塞诱发整体缺血性低氧性脑损伤，可模拟临床上脑缺血引起的急性昏迷、心脏骤停、窒息、休克、严重心律失常等危重临床病症。同时，四支血管闭塞主要导致海马体^17,18 的损伤，海马体是负责认知记忆的主要功能性大脑区域 19,20,21。因此，四支.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
16 channel microfiber photoelectrode array	Jiangsu Yige Biotechnology Co., Ltd	2605
4-0 Surgical suture	Nantong Holycon Medical Devices Co.,Ltd.	B-104
6-0 Surgical suture	Ningbo MEDICAL Needle Co., Ltd.	JM1216-742417
EEG electrode	Kedou Brain machine Technology Co., LTD	KD-EEGEMG
Electrocoagulation pen	CONPUVON Company	465
Lunion Stage Automatic Sleep Staging System	Shanghai Lulian Intelligent Technology Co., Ltd.	1336
Miniature hand-held skull drill	Rayward Life Technology Co., Ltd	87001
Penicillin sodium	Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.	17121709-2
SD rats	SPF ( Beijing ) Biotechnology Co.,Ltd.	180-220g
Skull nail	GLOBALEBIO,LTD	/
Stereotaxic instrument	Rayward Life Technology Co., Ltd	68801
Zoletil 50	Vic Trading (Shanghai) Co., LTD	BN 88SHA