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(紫外-可见) 的紫外-可见光谱法

Overview

资料来源: 实验室的博士 B.吉尔 Venton-弗吉尼亚大学

(紫外-可见) 的紫外-可见光谱法是最受欢迎的分析技术之一,因为它是非常多才多艺,能够检测到几乎每一个分子。紫外-可见光谱法,紫外-可见光光通过样品和样品的光透射率衡量。从透光率 (T),可以作为 =-日志 (T) 计算吸光度。吸光度谱表明在不同波长的吸收的化合物。所用的任何波长处的吸光度是由于分子的化学结构。

紫外-可见可用于以定性的方式,确定官能团或通过匹配吸收谱确认身份的一种化合物。作为分析物的浓度与吸光度使用啤酒的法律,也可以以定量的方式,使用它。紫外-可见光谱法用于量化的 DNA 或蛋白质在示例中,水分析,以及对许多类型的色谱的检测器。化学反应动力学也通过随着时间的推移在重复的紫外-可见测量,测量与紫外-可见光谱。一般用分光光度计进行紫外-可见度量。紫外-可见也是非常受欢迎仪其他分析技术,如色谱法,因为它可以检测许多化合物。

通常,紫外-可见不是光的最敏感的光谱技术,因为不是光的很多被吸收在较短的路径长度。其他如荧光的光谱技术有较高的灵敏度,但他们不是作为一般适用,因为大多数分子不是荧光。紫外-可见到其他吸光度测量,如红外光谱相似的灵敏度。

Procedure

1.校准分光计

  1. 紫外可见光谱仪打开,允许灯,以适当的一段时间 (大约 20 分钟) 以稳定他们热身。
  2. 试管装满样品的溶剂和确保外面是干净。这将作为一片空白,并有助于占光损失散射或吸收的溶剂。
  3. 将试管放在分光计。请务必正确对齐的试管,试管一样经常有两面,这意味着处理 (可能槽) 而不是通过的光芒。
  4. 以阅读为空白。吸光度应该很小,但任何吸光度应减去未来样品。一些文书可能将空白数据存储和自动执行减法运算。

2.执行吸收光谱

  1. 试管装满样品。若要确保转让是定量,冲洗两次与样本试管,然后填充它关于 ¾ 充分。请确保外面是清洁的任何指纹,等等。
  2. 将试管放在光谱仪在正确的方向。
  3. 盖试管以防止任何光线。
  4. 通过允许通过不同波长扫描和收集吸光度的手段来收集吸收谱。波长范围可以设置与信息有关该特定的示例,但一系列 200-800 nm 是标准。二极管阵列仪器是能够收集在一个运行整个吸收谱。
  5. 从收集的吸收光谱

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Results

紫外-可见可以用于获取各种有色化合物。在图 1A,所示的蓝色染料的吸收光谱。背景显示在可见光谱的光的颜色。蓝色染料在橙红色的 λ最大吸光度。图 1B显示频谱的一种红色染料,与 λ最大的绿色。

可以从情节随着时间的推移在一个波长吸光度测量动力学。图 2显示了一块蓝染料的吸光度 (在 6...

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Application and Summary

紫外-可见用于许多化学分析。它用来定量的大量蛋白质在溶液中,大多数蛋白质强烈吸收在 280 nm。图 3显示一个示例谱细胞色素 C,具有高吸光度亚铁血红素基团在 450,280。紫外-可见也用作为一种标准技术量化的 DNA 样本,因为所有的垒强烈吸收在 260 nm。RNA 和蛋白质也吸收在 260 nm,所以可以测量其他波长处的吸光度,检查是否有干扰。具体而言,蛋白质强烈吸收在 280 nm,所以 280/2...

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UV Vis SpectroscopyAnalytical TechniqueLaboratorySample AbsorptionTransmissionAbsorbanceQuantitative AnalysisQualitative AnalysisAbsorbance SpectrumConcentration DeterminationCompound IdentificationReaction KineticsPhoton AbsorptionGround StateEnergy StateBand GapUnique Absorbance SpectraBeer s LawMolar Attenuation CoefficientPath Length

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Overview

1:11

Principles of UV-Vis Spectroscopy

3:46

Absorbance Measurements with UV-Vis Spectroscopy

5:30

Kinetics Experiments with UV-Vis Spectroscopy

6:47

Applications

8:57

Summary

此集合中的视频:

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(紫外-可见) 的紫外-可见光谱法

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