首先，将 NMR 脉冲程序下载到运行 NMR 波谱仪的计算机上的目录中，并调整 TopSpin 版本。将 NMR 形状的脉冲下载到目录中，并验证 TopSpin 版本是否已相应更新。确定光谱宽度和适当的采集时间后，在 TopSpin 软件中键入 edc 到新目录以复制 HSQC 实验。
要打开 ased 类型的脉冲序列参数，请单击 PULPROG 参数旁边的三个点，将脉冲程序更改为 nitrogen-15 R1 rho experiment。双击脉冲程序，单击 Set PULPROG to the dataset（将 PULPROG 设置为数据集），然后单击 OK（确定）确认。键入 ased 以打开脉冲序列参数。输入脉冲序列中给出的所有缺失梯度强度和梯度长度。
接下来，在采集参数窗口中为环路计数器 L3 输入氮气 15 TD 条目的一半。为循环计数器 L6 输入记录的松弛数据点的数量，以拟合松弛曲线。设置绝热TanhTan_half。
nl 脉冲作为氮气 15 SP8 脉冲的形状。然后设置绝热TanhTan_half2nd。nl 脉冲作为氮气 15 SP9 脉冲的形状。
确保脉冲长度足够长，以实现绝热性，P8 设置为 3， 000 微秒。然后将 interscan recovery delay D1 设置为至少 2 秒或更长时间。将虚拟扫描次数设置为至少 64。
首先，将扫描次数设置为 4，如果信噪比太低，则使用 4 的倍数。将 O1 设置为校准的载波频率，将 O2P 设置为百万分之 176，并从质子氮 15 HSQC 实验中复制 O3P。现在，将脉冲长度 P7 设置为之前校准的 90 度脉冲长度。
然后将 90 度脉冲的脉冲功率电平复制到 PLW3 和 PLW7。然后，将脉冲长度 P1 和 P19 设置为 90 度质子脉冲长度。设置间接维度中的增量数，TD 等于 L3 乘以 L6 的 2。接下来，将整形脉冲 SP5 设置为 I-BURP2 形状，将脉冲长度 P15 设置为 2， 000 微秒。
然后，在 TopSpin 脉冲序列参数窗口中单击 I-BURP2 形状脉冲旁边的 E，打开“形状工具”显示。要模拟成形脉冲，请单击 Start NMR Simulation（开始 NMR 模拟）按钮。在模拟窗口中检查 Shaped pulse length 和 rotation angle （成形脉冲长度） 和 rotation angle （旋转角度），然后单击 Start NMR SIM （启动 NMR SIM） 继续。
检查模拟中的激发范围，并选择合适的 I-BURP2 脉冲长度，以覆盖质子谱色散，同时避免水的激发。将 P15 设置为具有最佳 I-BURP2 脉冲的仿真窗口中的整形脉冲长度。现在，将 SPOFFS5 设置为调整 I-BURP2 脉冲的载波频率，向左或向右移动激励范围以避免水磁化干扰。
然后打开布鲁克形状工具并单击开始 NMR 模拟，以确定整形脉冲的适当功率水平。将 I-BURP2 脉冲长度设置为整形脉冲长度，并注意模拟窗口中显示的软矩形 90 度质子脉冲长度。键入 calcpowlev 以计算 90 度硬质子脉冲和软矩形 90 度质子脉冲之间的分贝功率级差。
将硬 90 度质子脉冲的功率电平复制到 SPW5，并通过添加以分贝为单位的记忆差值进行调整。要确定自旋锁的功率水平，请计算相应的 90 度氮气 15 脉冲长度。使用 calcpowlev 计算自旋锁定功率和硬 90 度氮气 15 脉冲之间的功率差（以分贝为单位）。
将硬 90 度氮气 15 脉冲的功率电平复制到 PLW7，并通过添加计算的功率差来调整自旋锁定功率电平 PLW8。将旋转锁定 PLW8 的功率级别复制到功率级别 SPW8 和 SPW9。要确定氮气 15 去耦的功率水平，请使用 calcpowlev 计算 90 度氮气 15 度去耦脉冲和 90 度氮气 15 硬脉冲的功率差。
将 90 度氮气 15 硬脉冲 PLW7 的功率电平复制到去耦功率电平 PLW31，并通过添加计算出的功率差（以分贝为单位）进行调整。对于温度补偿，请在脉冲程序中包括 line define TEMP_。将 P18 设置为氮气-15 R1 rho 实验中使用的旋转锁的最大持续时间。
对于氮-15，碳 13 标记的样品在脉冲程序中包括线定义LABEL_CN。将 P4 设置为计算的脉冲长度。使用 calcpowlev 计算 P4 和碳 13 硬脉冲之间的功率差（以分贝为单位）。
将碳 13 硬脉冲的功率电平复制到 PLW4，并添加计算出的功率差（以分贝为单位）。将 PLW4 复制到 PLW2。要确定采样的适当弛豫延迟，请运行前 8 个自由感应衰减 （FID） 并对其进行处理。
选择最长延迟实验的峰值强度降低到至少 e 的 1 倍，但与最短延迟实验相比不低于 25% 的 vplist 条目。在命令行中键入 rga 以确定接收器增益。通过在命令行中键入 zg 来启动氮气-15 R1 rho 实验的试运行。
检查是否对所有延迟都抑制了 water 信号。此外，检查增量 9，即正交检测方案的第二个增量。
