昆虫精母细胞中染色体的显微操作

这种方法可以帮助回答细胞生物学中的关键问题，例如，张力在满足主轴检查点方面有多重要，在miosis的染色体行为中，主轴附件的作用是什么？这种技术的主要优点是，它是一种非致命性技术，允许实验者对活细胞中的染色体施加张力或重新定位染色体。首先，准备一个75由25毫米的幻灯片与一个直径20毫米的圆形孔切出中心。

然后，运行一个25由25毫米数1.5盖通过一个本森燃烧器火焰两秒钟。在玻璃滑梯的孔边缘周围涂抹真空润滑脂。接下来，将盖滑过孔并按下，形成紧密的密封。

翻转滑梯，用卤化油填充新创建的解剖井。获得一些成年雄性板球后，使用解剖剪刀切割平行于腹部长轴的后侧表面，直接在翼芽后面。然后，轻轻挤压腹部，将睾丸推入外骨骼的切口。

使用钳子，将隔离的睾丸放入解剖井中。在解剖显微镜下，使用细指钳将睾丸分成更小的碎片，并去除任何脂肪。然后，将睾丸的内装物铺在盖缝表面的油下。

继续传播睾丸的内容，直到肉眼几乎看不到扩散部分。如有必要，可以使用额外的装油解剖井。首先，将玻璃管的末端放在本森燃烧器的火焰中。

握住管子的端，形成 150 度角和窄玻璃管的扩展区域。打破薄区域中的油管，使从以前创建的角度延伸的薄区域大约 10 毫米长。使用微福，熔化玻璃针的尖端，在针和微叉的铂丝之间形成45度角。

然后，将玻璃从电线上拉出，同时关闭热量。将先前准备的幻灯片放在倒置相对比度显微镜的舞台上。然后，找到分割的单元格，并使用尽可能低的放大倍率在视场中居中。

将微针放入微操纵器的针架中。然后，手动将微对象置于显微镜的光路径中。聚焦显微镜，使包含细胞的平面上方的几个焦点平面。

接下来，使用操纵手柄控制器多次重新定位微针，以在 x 轴和 y 轴中查找针的阴影。重新调整针的位置，直到尖端的位置可见，然后，沿 z 轴调整针的位置，直到尖端对焦。接下来，重新聚焦在细胞上，将显微镜聚焦在细胞平面的上方。

然后，重新调整针头的位置，使尖端在此焦点平面中处于焦点位置。使用较高的放大率目标和更高的灵敏度设置重复此过程。重新聚焦细胞，并调整它们的位置，使它们保持在视野的中心。

使用操纵杆控制微需要，因为它推动细胞内的染色体。确保针尖保留在细胞上方的平面中。要移动染色体，请聚焦在细胞顶部附近的染色体上。

然后，调整操纵手柄上的 z 轴，使针尖对焦，并将指针与操纵手柄一起移动 x 和 y。将针头的尖端直接放在感兴趣的染色体上，然后按所需方向推动。施加足够的张力将染色体与主轴分离。

最后，将染色体放在细胞内的任何地方。使用此协议，可以重新定位、应用张力，并使用微操纵将染色体从主轴上完全分离。在此示例中，两个纵的染色体被不断用微操纵针轻推，使两个纵的染色体无法重新连接到主轴上。

一旦掌握了样品，就可以准备操作，微型操纵器可以在15到20分钟内定位。微管理实验可能需要几秒钟到几个小时。在尝试此过程时，重要的是要记住在离盖滑最远的细胞一侧操作染色体。

该技术开发后，为细胞生物学领域的研究人员探索蝗虫和祈祷蟑螂的主轴检查点铺平了道路。