查加斯病的锥虫科鲁西剂可能会产生持久的症状感染，可能进入临床公认的病理学。在一名死于恰加斯病的男孩的半尼弗管中发现锥虫瘤的克鲁西巢，表明研究方案可以解开查加斯寄生虫可能的性传播。提供五年的医疗保健，并招募家庭，显示患有急性恰加斯病的临床症状的参与者，ACG。
相隔一年三次获得15毫升家庭参与者的静脉血，分为三、五密耳，储存在四摄氏度。从成人志愿者那里收集的两毫升血清射精显示ACG病例血液中的T.cruzi，以验证分子检测。从ACG血液中分离T.cruzi，用抗凝剂储存在无菌的10ml管中。
将5毫升血液接种到50毫升管倾斜，加上5毫升肝脏输液尝试性介质，在27摄氏度的摇床中孵育三个月。在玻璃幻灯片上 100 微升的超量镜中搜索显微镜。从离心的介质中收获旗帜，以 1，000 x G 进行 10 分钟，用 PBS pH 7.4 洗涤。
接种 75 ml L6 肌肉细胞培养瓶每个与 10 至第六 T.cruzi 分离。用 15 ml 的 Dulbecco 最小基本介质喂养培养细胞，在 37 摄氏度时提供 DMEM。生长寄生虫分离物和正对贝雷尼斯T.克鲁西。
在 DMEM 中将 T. cruzi 相对 Leishmania 巴西病作为负对照。使用 10 x 10 到第六组织培养物衍生出 T.cruzi 试虫感染小鼠。在一个月后，在肌肉和生殖器官的各部分搜索T.cruzi的巢。
使用EDTA康宁无菌10ml管中的血液等分，在3000 x G的密度梯度离心中收集白细胞45分钟。用 PBS 清洗两次细胞，在 1，500 x G 下离心机，在不同的管下清洗 10 分钟。从从109个家庭受试者和21名参与者的精子中提取从109个家族受试者的贝雷尼斯T.cruzi的分离物中提取DNA，如在协议的第3.3步。
测量0.8%的加糖凝胶上的DNA浓度，并在206纳米时吸收。在 PCR 分析中，使用 T.cruzi TCZ 一破折号两个底片退火到 188 核苷酸探针。使PCR与10纳米图模板DNA、每对底塑剂的0.4微摩尔、两个单位的DNA聚合酶、0.2微摩尔DNA-TPs和5微摩尔氯化镁在25微升最终体积中混合。
执行步骤 3.5.2 中的 DNA 扩增，并在凝胶中显示 DNA 波段。使用 T.cruzi 188 核苷酸探针，将 α 32P dATP 的底注标签与 alpha 32P dATP 进行分离，并在 1.3% 的 agarose 凝胶上分离 PCR 产品，并转移到带正向的尼龙膜上。清洗膜，现在暴露在不同周期的X射线场。
使用 TCZ 一破折号两个底转器，对从 X 射线场选择的克隆进行商业序列。在109名研究参与者中进行三个独立的免疫荧光测定，并在PBS中进行1至100个血清稀释1至100次稀释。将封闭血液中的5毫升等分在1000 x G下离心30分钟，将血清储存在零下20摄氏度。
运行独立的免疫荧光血清稀释从研究样品获得三次一年分开。使用5微升正式孵育的T.cruzi母体或L.巴西西普罗斯龙，10个寄生虫每微升在PBS悬浮液玻璃幻灯片上，让它干燥过夜，如步骤5.3.3。用100微升的1至100微升的血清稀释剂孵育玻璃上的寄生虫，并在37摄氏度的湿润室中用滑液覆盖一小时，然后用PBS洗涤两次。
用1到1000个荧光素的荧光素，将标有兔的抗体用于人类IgG，洗涤和干燥，孵育风干玻璃滑梯。用盖滑将玻璃滑梯安装，并在紫外光显微镜下检查。在100微升碳酸盐缓冲液pH9.6中检测T.cruzi和L.巴西易溶性抗原1微克。
在三分四分之一井中用100微升的1至100微升血清稀释。用 PBS-Tween 溶液清洗板两次，然后等待干燥。孵育用100微升的1至1000稀释碱性磷酸酶结合，山羊抗兔IgG。
用PBS-Tween清洗板两次，加入底材，加入亚硝基苯丙酸，等待颜色发展。在多模板读卡器中读取 630 纳米的光学密度。将肥沃的鸡蛋转干，在它们的气泡下在壳上打个洞。
在模拟控制鸡蛋的每个壳培养基上接种100个试药。用胶带密封孔。在37摄氏度孵育卵子，65%湿度21天。
从活对照蛋A组孵化的小鸡，从模拟对照组，B组和T.cruzi接种的卵子，C组孵化，直到他们的成年生活。挑战B组和C组的鸡两次与10×10到第七正式孵化的试杀剂每周。挑战五周后，从 A、B 和 C 鸡的翼静脉获得两毫升静脉血。
分离血清并运行免疫荧光分析仪以检测T.cruzi抗体。通过出色的住房、食物和供水，确保动物福利。使用来自成人的精液射精和 APCR 阳性的 Chagas 病病例，以及从协议步骤 1.5 中的对照对象。
将100微升的精液注入内皮内和小鼠的阴道。父母和后代小鼠的T.cruzi感染的性传播。急性恰加斯病的锥形瘤的足迹由与无线电标记探头提前形成的 nDNA-PCR 产品显示。
T.cruzi的表型通过免疫荧光测定而揭示出来。反 T 。克鲁西抗体不能识别L.巴西西。
ELISA 和 nDNA-PCR 测定的图形表示。组一和二分别负和正控制。第三组，阳性nDNA-PCR和特异性抗体测定。
第四组与NDNA-PCR检测到的T.cruzi感染，但在没有特异性抗体的情况下。第五组，无感染参与者。家庭人口的地谱图和制图显示，反T的比例存在差异。
克鲁兹抗体和nDNA-PCR测定的抗体。开放是方形和圆形，负男和女。红色与防 T 。
克鲁西抗体和nDNA-PCR阳性。黑色， 正 ndna - pcr 单独。从T.cruzi接种的鸡蛋中孵化的鸡的免疫耐受性。
A， 模拟控制， B， 活对控鸡挑战与 T. cruzi 抗原.C， 鸡孵化从 T. cruzi 接种鸡蛋后， 挑战与特定的抗原.T.cruzi的感染性在精液注入腹腔和阴道时表现出来。
这些静止物中牺牲了三周的老鼠，显示出心脏、骨骼肌、血管和子宫管中的阿玛斯蒂奥特巢。小鼠模型系统中T.cruzi感染的性传播。T.cruzi感染的男性和女性，将感染传播给天真的伴侣。
T.cruzi感染垂直从父母转移到后代小鼠。南方的印迹揭示了大多数F1垃圾中的寄生虫角带。免疫过氧化物酶污渍T.cruzi amastigotes显示，在表皮炎的间质和进入后代小鼠的半硝基管的流明中。
在21例恰加斯病急性病例中，原生动物的寄生虫学证明对于验证所有受感染受试者的T.cruzi足迹至关重要。寄生虫抗体测定与核酸检测比例的差异表明，无抗体患者的大部分足迹。在胚胎发育的第一周后，在鸡模型中，向T.cruzi反映了广泛的差异。
免疫耐受性成年鸡显示寄生虫的脚印，但没有特定的抗体。查加斯患者解热中至关重要的抗克鲁西在注入小鼠阴道以及腹腔后引起广泛感染。病理学显示，T.cruzi amastigote巢在心脏和骨骼肌肉，在血管延迟和子宫管。
查加斯小鼠与天真伴侣的繁殖表明，受感染的雌性小鼠和雄性将T.cruzi传播给未受感染的幼鼠，它们的大部分垃圾获得感染垂直转移到后代。基于家庭的议定书涉及核酸检测，以便进行可靠的输血和流行病学调查，并阐明潜在的持续性传播恰加斯病。
