这种方法可以帮助回答肠道神经科学和胃肠道生理学中的关键问题，例如，肠激素细胞兴奋和对发光刺激的反应的机制是什么，胃肠道激素释放的机制是什么？这种技术的主要优点是，它允许我们使用单细胞技术，如电生理学，详细研究肠球细胞。演示这个程序的将是共同第一作者凯特琳·克努特森和彼得·斯特雷格，杰出的技术专家谁开发了这些技术。
要开始此过程，请将一根装满冰冷 PBS 的六毫升注射器针头放入提取的肠道段的流明中。使用微排液钳，将肠道夹在注射器针周围并密封，然后通过流明轻轻冲洗六毫升 PBS 以冲洗掉任何粪便。接下来，通过轻轻编织微切除钳通过流明，捏住肠壁，并收回组织近到钳子的尖端，反转肠道组织。
重复此过程，直到段内向外，流明朝外。使用微切除剪刀，将组织部分切成一厘米。然后将组织片段转移到一个50毫升的烧杯中，里面装满了5毫升的无菌PBS。
随后，将组织碎片切成液化的一致性。将切碎的组织和 15 毫升的冰冷 PBS 转移到干净的 50 毫升管中。使用移液器三次三次。
等待组织稳定下来。之后，取出 15 毫升的 PBS 上一液，然后更换为新鲜 PBS。重复此过程三次，直到 PBS 清晰。
对于第一次消化，从水浴中，取回含有10毫升预热消化介质的50毫升管之一。接下来，在管中加入250微升的PBS胶原酶溶液，并加入切碎的肠道。最后，将切碎的肠道组织片添加到消化介质和PBS胶原酶溶液中。
然后，将样品放在水浴中，在37摄氏度下放置5分钟。用10毫升血清移液器慢慢滴定组织一次，并短暂地让组织片段沉淀。使用转移移液器去除10毫升的上流液。
对于第二次消化，在组织中加入250微升PBS胶原酶溶液，并将其放在37摄氏度的水浴中。之后，使用 10 毫升血清移液器缓慢滴定溶液一次。然后取出10毫升的上一液。
对于第三次消化，在管中加入250微升PBS胶原酶溶液。在37摄氏度的水浴中放置10分钟。然后每分钟摇动管子两到三次，强度比消化一和二高。
随后，用10毫升血清移液器缓慢移液组织上下，让组织片段在短时间内沉淀。将10毫升的上一液转移到新的15毫升管中。添加两毫升加热的EC细胞完整培养培养，并反转一次混合。
接下来，在室温下以100克旋转样品5分钟。五分钟后，取出上经液，在2.5毫升加热的EC细胞完整培养中重新悬浮剩余的颗粒。对于第四次消化，重复消化程序，但增加结肠的潜伏时间15分钟，并保持在10分钟为jejunum。
为了培养细胞，使用转移移液器将从消化中收集的细胞悬浮液组合成新的15毫升管。取出10微升的细胞等分，用血细胞计计数。然后在室温下以100g旋转剩余的细胞悬浮液5分钟。
五分钟后，取出上流水线，使用每毫升100万个细胞的密度，使用5毫升血清学移液器添加EC细胞完整培养培养。使用转移移液器重新悬浮组织。随后，从培养箱中取出涂层玻璃底培养皿。
使用 P1000 移液器，用最终细胞悬浮液的 250 微升替换每个培养皿中的额外细胞基质。要实现整个细胞千兆酶，请将电极降低为沐浴液中。使用微操纵器，将电极尖端在平面上与电池直接水平操纵。
然后从注射器中排出0.2毫升的空气。沿 X 轴水平移动电极以触摸电池。注意在 EC 电池上出现酒窝，以及密封测试中膜电阻的增加。
在注射器上涂抹 0.1 至 0.2 毫升的吸力，使柱塞保持稳定，直到达到 100 兆欧姆。然后从柱塞松开手柄。等待单元格的千兆。
然后轻轻断开注射器。要记录全电池电压门的钠电流，请快速在注射器上轻快吸气。重复，直到实现整个细胞访问，然后轻轻地断开注射器。
接下来，打开整个细胞电容补偿，并调整电容和系列电阻。打开系列电阻补偿。将滞后设置为 60 微秒时，调整系列电阻补偿并关闭密封测试。
记录全单元电压门钠电流的平均值为五次。快速记下电压门控钠电流的两个参数:窗口电流的电压和钠电流峰值密度。要记录引出的操作电位，请将模式从电压夹切换到电流夹。
加载偶发电流钳子协议。将保持电流调整为零皮安，然后打开外部命令。记录引出的操作潜力。
请注意注入的用于发射操作电位的电流量最少。要记录自发的操作电位，请关闭外部命令。加载无间隙电流夹具协议。
将保持电流更改为在引出的协议中上次扫描中注入的未激发操作电位的电流量。随后，打开外部命令。仔细检查预测的保持电流使膜电位低于阈值以触发作用电位。
如有必要，调整保持电流并记录自发活动。已针对电生理学优化的培养物包括单细胞和具有明亮 CFP 信号的小团块。当培养条件尚未优化时，上皮细胞培养由大团块、浮动细胞碎片、受损膜和EC细胞中弱的CFP信号组成。
EC全细胞的尝试为30正负7%，从结肠培养物中得到41次正负3%。按全细胞电生理学，钠电流记录从81.3加或负4.0%的TPH-1 CPF阳性细胞从jejunum和64.1加或负9.2%从结肠。在来自jejunum培养的59个EC细胞中，19个处于当前夹紧模式的EC细胞发射自发AP，29个EC细胞仅在电流夹紧模式下的步进协议引起时发射AP，11个EC细胞没有自发或通过步进协议发射AP。
在尝试此过程时，重要的是要记住，原上皮培养物的最佳消化协议在用途之间可能是可变的，因此确定获得单细胞的最佳搅拌量非常重要。按照这个程序，其他方法，如单细胞PCR和荧光，可以执行回答其他问题，如什么肠球菌素细胞表达和刺激如何耦合到细胞间信号。经过这一发展，这项技术为胃肠道生理学的研究铺平了道路，以探索肠胃细胞是如何工作的，以及如何调节小鼠的胃肠道运动和分泌。
