联合遗传和化学衣壳改性腺病毒基因转移载体用于屏蔽和靶向

该方法有助于回答基因治疗、药物分析、遗传疫苗接种领域关键问题。它有助于理解和调节腺病毒基因转移载体的载体宿主相互作用，这是临床试验中最常用的载体类型。该技术的主要优点是，腺病毒倾覆可以通过使用简单的化学方法，在选定位置以高度定义的方式进行专门修饰。

这种技术的影响延伸到治疗，因为载体宿主的修改不能只分析，而且以以病人为导向的方式调制。虽然此方法提供了对特定病媒宿主相互作用的洞察，但也可用于标记和跟踪生物体（如小鼠）中的病毒颗粒。一般来说，对这种方法的新鲜人将挣扎与病毒学和有机化学的独特组合，需要从这两个领域的实际知识。

这项技术的特殊演示至关重要，因为有机化学方法与细胞生物学和病毒学的方法相遇，包括现场特定的处理技巧。若要开始此过程，请准备文本协议中概述的所有缓冲区。称重每个梯度缓冲液的一毫升，以检查其密度。

消毒所有缓冲液后，用气孔气将含有 TCEP 的缓冲液用气进行约 30 秒的消毒，以防止 TCEP 氧化。将含有固体粉末耦合莫伊蒂的小瓶存放在较大的管子中，每个管子都装满了硅胶珠垫，以防止在解冻小瓶时凝结水。将这些管子放入干燥器中。

清除干燥器中的空气，然后用气气体更换。然后紧密地合上每个管子，然后用硅胶珠将其转移到更大的容器中。转移所有管子后，关闭容器。

将容器存放在 80 摄氏度，直到准备好使用。准备解冻时，将容器放入干燥器中的硅珠层中。让容器慢慢加热到室温，然后打开容器。

当细胞达到最佳细胞病变影响时，通过刮板并将上流液转移到离心管来收集它们。在 400 次 G 下旋转电池悬浮液 10 分钟。接下来，将细胞颗粒重新悬浮在含有10毫摩尔TCEP的4毫升Ad缓冲液中，将所得溶液转移到无菌的50毫升管中。

将溶液冷冻在液氮中，然后在37摄氏度的水浴中解冻。重复此冻结解冻循环三次以拯救矢量。在5000G和4摄氏度下离心10分钟。

离心时，设置了两个超离心管，开始制备两个相等的氯化硅步梯度。向每个管中加入三毫升的下相。在装载上相之前，标记管子上下相的水平。

然后小心地将上相的五毫升堆叠到下相，沿着管壁缓慢地将它移下来。当梯度准备好并离心完成时，从样本中平均加载上一个液位，同时在两个梯度上。用含有十毫摩尔 TCEP 的广告缓冲器填充每个梯度管的剩余空间，确保将管填充到顶部。

将相反管的重量调整为零重量差。并改变离心机176000倍G和4摄氏度两个小时。在此之后，使用夹子将一个超离心管固定到支架上。

确保使较低相位水平周围的区域保持可访问性。将鹅颈灯放在管子上方。在标记周围，在下部和上相之间的边框处，应可见一个不同的波段。

用针刺破管子，将病媒带吸入注射器以收集病媒。将收集的矢量病毒转移到 15 毫升管中，并计算文本协议中概述所需的耦合基板量。然后，将矢量溶液转移到适当大小的管中。

并计算耦合化合物库存溶液的量。在室温下，通过头顶旋转轻轻混合一小时。接下来，通过添加 Ad 缓冲区，将矢量解的总体积调整为 6 毫升。

使用文本协议中概述的第二个氯化硅结合步骤，从未反应耦合摩尔蒂中纯化向量。用针头刺穿管子，将载体带吸入注射器。将收集的向量转移到15毫升管。

如果两个梯度管的组合小于 2.5 毫升，则通过添加 Ad 缓冲区将音量调整为 2.5 毫升。将组合的维龙加载到等升级的 Pd 列上，然后丢弃流通过。然后向列添加三毫升广告缓冲区并收集流。

在收集的流量中加入333微升甘油，获得10%的最终浓度。将它们分成合适的等分。确保包括 20 微升的等分，通过 OD 260 测量进行更严格的测定。

将矢量溶液存储在 80 摄氏度，直到准备好使用。对293个细胞的影响有代表性的结果表明，向量生产是成功的。细胞在接种病毒载体后40-48小时应显示形态。

然后，银染色 SDS 噬菌群用于评估耦合效率。将引入半胱氨酸的矢量与十六进制修改和未修改的帽粒体彭酮基座一起运行。Hexon 频段表现出一个转变，表明每个帽数超过 90% 的单体成功修改。

在尝试此过程时，必须确保非模数矢量粒子的减少环境。修改后，适合有规律的大气。精确的单据计算必须确保所有矢量粒子的定量修改。

这项技术的发展有助于基因治疗领域的研究，以进一步探索病媒传递的安全和缺陷策略。按照这个程序，可以执行其他方法，如配体对标的耦合或用于标记的荧光染料，以回答其他问题，如受体使用和生物分布。请务必遵守您当地的 GMO 和工作安全法规。