该方法有助于回答与土壤植物病原体生物控制有关的关键问题。测试堆肥等材料的黄金标准是进行植物生物测定,以测试它是否对植物有毒。然而,这需要三个星期。
此方法可以在两到三天内完成。这种技术的主要优点是简单、经济、有效。这种检测是特定堆肥的快速筛选,以抑制Rhizoctonia solani的生长。
然而,这种测定也可用于其他土壤传播的植物病原体,如富萨里姆、紫土和植物。此方法的视觉演示至关重要,因为它在避免污染的同时,注意隔离和维护真菌的纯培养物。证明隔离程序的将是泰勒·雷迪霍夫,一个研究生从我的实验室。
艾玛·赖特,我实验室的本科生,将演示竞争检测。首先,在已知有R.solani病史的土壤中播种红萝卜种子。三到四周后,将幼苗从土壤中取出,然后用自来水冲洗。
使用剃须刀刀片,切割具有棕色的低边根和根的一厘米段。然后,使用火焰消毒钳将部分浸入 10% 漂白剂溶液中一分钟。在此之后,用无菌水冲洗段。
接下来,使用火焰消毒钳将段转移到纸巾上。将段子擦干,然后将它们与水加水一起转移到培养皿中。将培养皿放在带盖子的容器内,并在室温下孵育分段。
要建立女儿文化,请将其中一个段转移到一盘新鲜土豆葡萄糖的水果的中心。在此之后,可 <3>5毫升试管含有10毫升水。将每个测试样品的两个 0.5 克样本添加到一对带 10 毫升无菌水的自 <3>开式试管中,并摇动试管过夜。
24小时后,在一对圆锥烧瓶中加入1.5克普通加糖和90毫升蒸馏水。将烧瓶高压灭后,放入45摄氏度的水浴中30分钟。接下来,将自动处理参考样品和活样品倒入熔融的加糖中。
将每个烧瓶中的混合物倒入五个培养皿中。为了保护本地微生物,重要的是不要添加堆肥,而阿加太热。因此,在添加堆肥之前,让阿加冷却至45摄氏度。
使用无菌技术,将 R.solani 片段转移到每对样品板。然后,在室温下孵育板一至两天。最后,使用透明、扁平的尺子和立体显微镜测量每个板中米丝的半径到最接近的毫米。
在该协议中,从活堆肥中提取的提取物抑制R.solani的生长明显超过自 <3>发样本,表明其作用是微生物的,而不是基于营养的。与自动 <3> <3>控制相比,抑制度被测量为增长的减少。生长不受堆肥成熟或固化期的影响。
生长受到堆肥方法和配方成分的显著影响,特别是与紫杉木,风向道,和食谱与硬木树皮。开发后,该技术可成为用于疾病抑制特性的堆肥商业认证的候选产品。