この方法は、土壌中の植物病原体の生物学的制御に関連する重要な質問に答えることができます。堆肥のような試験材料のゴールドスタンダードは、植物に有毒であるかどうかをテストするための植物バイオアッセイを持つためです。しかし、それは3週間かかります。
この方法は、約2〜3日で行うことができます。この技術の主な利点は、それが簡単で、手頃な価格で、効果的であるということです。このアッセイは、根球菌の成長を抑制する特定の堆肥の迅速なスクリーニングである。
しかし、このアッセイは、フザリウム、ピシウム、フィトフトラスなどの他の土壌植物病原体に対しても使用できます。この方法の視覚的なデモンストレーションは、汚染を避けながら真菌の純粋な培養物を分離し維持するために注意を払うので重要です。隔離手順を実証することは、私の研究室の大学院生であるテイラー・レディハフです。
私の研究室の学部生であるエマ・ライトが競争のアッセイを実演します。まず、R.solaniによって引き起こされる病気の既往歴を持つ既知の土壌に赤大根の種子をまきます。3~4週間後、土から苗を取り出し、水道水ですすい水にします。
カミソリの刃を使用して、茶色の色を持つ低コチルと根の1センチメートルのセグメントをカットします。次に、炎殺菌鉗子を使用して、セグメントを10%漂白剤溶液に1分間浸します。この後、滅菌水でセグメントをすすいします。
次に、炎の殺菌された鉗子を使用して、ペーパータオルにセグメントを移します。セグメントを乾かして、水寒天でペトリ皿に移します。蓋付きの容器の中にペトリ皿を置き、室温でセグメントをインキュベートします。
娘の文化を確立するには、ジャガイモデキストロース寒天の新鮮なプレートの中心にセグメントの1つを転送します。この後、10ミリリットルの水を含む25ミリリットルの試験管をオートクレーブする。各試験サンプルの2つの0.5グラムサンプルを10ミリリットルの無菌水を含むオートクレーブ試験管のペアに追加し、一晩試験管を振ります。
24時間後、円錐形のフラスコに1.5グラムのプレーン寒天と90ミリリットルの蒸留水を加えます。フラスコをオートクレーブした後、45°Cの水浴に30分間置きます。次に、オートクレーブ参照サンプルと生きたサンプルを溶融寒天に注ぎます。
各フラスコの混合物を5つのペトリ皿に注ぎます。先住民族の微生物を保護するためには、寒天が熱すぎる間に堆肥を追加しないことが重要です。したがって、堆肥を追加する前に、寒天が摂氏45度まで冷却するようにします。
無菌技術を使用して、R.solaniの各ペアのサンプルプレートに移します。その後、プレートを室温で1〜2日間インキュベートする。最後に、平らな定規とステレオ顕微鏡を使用して、各プレートの菌糸体の半径を最も近いミリメートルまで測定します。
このプロトコルでは、生きた堆肥からの抽出物は、オートクレーブサンプルよりもR.solaniの増殖を有意に抑制し、その効果は微生物であり、栄養ベースではないことを実証した。抑制性は、オートクレーブ制御と比較して成長の減少として測定される。成長は、堆肥の成熟または硬化の持続時間によって影響を受けなかった。
成長は、堆肥方法とレシピ成分、特にバーミコンポスト、ウィンドロウプロセス、およびハードウッド樹皮のレシピによって有意に影響を受けた。その開発後、この技術は、疾患抑制性のための堆肥の商業的認証の候補となる可能性がある。
