Assay תחרות צלחת כמו הערכה ראשונית מהירה של דיכוי מחלות

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח הקשורות לשליטה הביולוגית של פתוגנים צמחיים המועברים באדמה. תקן הזהב לבדיקת חומרים כמו קומפוסט הוא לקבל bioassay צמח כדי לבדוק אם זה רעיל לצמחים. עם זאת, זה לוקח שלושה שבועות.

שיטה זו יכולה להיעשות בערך יומיים עד שלושה ימים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא פשוטה, סבירה ויעילה. מבחן זה הוא סינון מהיר של קומפוסט ספציפי כדי לדכא את הצמיחה של Rhizoctonia סולאני.

עם זאת, ניתן להשתמש בהגם נגד פתוגנים צמחיים אחרים המועברים באדמה, כגון פוסריום, פיתיום ופיטופתוראס. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית משום שהיא דואגת לבודד ולשמור על תרבות טהורה של פטרייה תוך הימנעות מזיהום. הפגנת הליך הבידוד תהיה טיילור Readyhough, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי.

אמה רייט, סטודנטית לתואר ראשון מהמעבדה שלי, תדגים את התחרות. כדי להתחיל, לזרוע זרעי צנון אדום באדמה ידוע שיש היסטוריה של מחלה הנגרמת על ידי R.solani. לאחר שלושה עד ארבעה שבועות, מוציאים את השתילים מהאדמה, ושטיפתם במי ברז.

בעזרת סכין גילוח, חותכים מקטעים באורך סנטימטר אחד של ההיפוקוטיל והשורש בצבע חום. לאחר מכן, השתמש במטסים מעוקרים בלהבה כדי לטבול את המקטעים בתווית אקונומיקה של 10% למשך דקה אחת. לאחר מכן, לשטוף את המקטעים במים סטריליים.

לאחר מכן, השתמש במדפים מעוקרים בלהבה כדי להעביר את המקטעים למגבת נייר. טופחים את הקטעים יבשים, ומעבירים אותם לצלחת פטרי עם אגר מים. מניחים את צלחת פטרי בתוך מיכל עם מכסה, ו דגירה את המקטעים בטמפרטורת החדר.

כדי להקים תרבות בת, להעביר את אחד הקטעים למרכז צלחת טרייה של תפוח אדמה dextrose אגר. לאחר מכן, אוטוקלאב 25 מיליליטר מבחנות המכילות 10 מיליליטר של מים. הוסיפו שתי דגימות של 0.5 גרם של כל דגימת בדיקה לזוג מבחנות אוטומטיות עם 10 מיליליטר של מים סטריליים, ונערו את המבחנות בן לילה.

לאחר 24 שעות, מוסיפים 1.5 גרם של אגר רגיל ו 90 מיליליטר של מים מזוקקים לזוג בקבוקי חרוט. לאחר autoclaving את flasks, למקם אותם לתוך 45 מעלות צלזיוס אמבט מים במשך 30 דקות. לאחר מכן, יוצקים את דגימת הייחוס autoclaved ואת המדגם החי לתוך אגר מותך.

יוצקים את תערובות מכל בקבוק לתוך חמש מנות פטרי. כדי להגן על המיקרואורגניזמים הילידים, חשוב לא להוסיף את הקומפוסט בזמן שהגר חם מדי. לכן, לאפשר אגר להתקרר ל 45 מעלות צלזיוס לפני הוספת הקומפוסט.

באמצעות טכניקה אספטית, להעביר חתיכות של R.solani לכל זוג צלחות מדגם. לאחר מכן, הדגירה את הצלחות בטמפרטורת החדר במשך יום עד יומיים. לבסוף, השתמש בסרגל ברור ושטוח ובמיקרוסקופ סטריאו כדי למדוד את רדיוס המיסליום בכל לוח למילימטר הקרוב ביותר.

בפרוטוקול זה, תמציות קומפוסטים חיים דיכאו את הצמיחה R.solani באופן משמעותי יותר מאשר דגימות autoclaved, המוכיחים כי ההשפעה הייתה מיקרוביאלית ולא מבוססת חומרים מזינים. דיכוי נמדד כירידה בצמיחה בהשוואה לשליטה האוטומטית. הצמיחה לא הושפעה ממשך ההבשלה או הריפוי של הקומפוסט.

הצמיחה הושפעה באופן משמעותי על ידי שיטת קומפוסט ומרכיבי מתכון, במיוחד עם vermicompost, תהליכי רוח, ומתכונים עם קליפת עץ. לאחר התפתחותה, טכניקה זו עשויה להיות מועמדת לאישור מסחרי של קומפוסט עבור תכונות מדכאות מחלות.