Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы, связанные с биологическим контролем патогенных микроорганизмов почвенных растений. Золотой стандарт для тестирования материалов, таких как компост, чтобы иметь биоанализ растений, чтобы проверить, является ли это токсичным для растений. Тем не менее, это занимает три недели.
Этот метод может быть сделано примерно за два-три дня. Основным преимуществом этой техники является то, что она проста, доступна и эффективна. Этот анализ является быстрый скрининг конкретного компоста для подавления роста Rhizoctonia solani.
Тем не менее, этот анализ также может быть использован против других патогенных микроорганизмов почвенных растений, таких как Fusariums, Питиумы, и Phytophthoras. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку он заботится, чтобы изолировать и поддерживать чистую культуру гриба, избегая загрязнения. Демонстрацией процедуры изоляции будет Тейлор Readyhough, аспирант из моей лаборатории.
Эмма Райт, студентка моей лаборатории, продемонстрирует конкурсный анализ. Для начала, сеять семена красной редьки в почве, как известно, история болезни, вызванной R.solani. Через три-четыре недели удалите саженцы из почвы и промойте их водопроводной водой.
Используя лезвие бритвы, вырезать один сантиметр сегментов гипокотила и корня, которые имеют коричневый цвет. Затем используйте стерилизованные пламенем типсы, чтобы окунуть сегменты в 10%bleach раствор в течение одной минуты. После этого промыть сегменты в стерильной воде.
Затем используйте стерилизованные пламенем типсы для переноса сегментов на бумажное полотенце. Пэт сегменты сухой, и передать их в чашку Петри с водой агар. Поместите чашку Петри внутрь контейнера с крышкой и инкубировать сегменты при комнатной температуре.
Чтобы создать дочернюю культуру, перенесите один из сегментов в центр свежей тарелки картофельного декстрозы агара. После этого автоклав 25-миллилитровые пробирки, содержащие 10 миллилитров воды. Добавьте два 0,5-граммовых образца каждого образца теста в пару автоклавных пробирок с 10 миллилитров стерильной воды и встряхните пробирки на ночь.
Через 24 часа добавьте 1,5 грамма простого агара и 90 миллилитров дистиллированной воды в пару конических колб. После автоматической облавы колбы, поместите их в 45-градусный по Цельсию водяной бане в течение 30 минут. Затем налейте автоклавный эталонный образец и живой образец в расплавленный агар.
Налейте смеси из каждой колбы в пять чашек Петри. Для защиты местных микробов, важно не добавлять компост в то время как агар слишком жарко. Поэтому дайте агару остыть до 45 градусов по Цельсию перед добавлением компоста.
Используя асептическую технику, перенесите кусочки R.solani на каждую пару образцов пластин. Затем инкубировать пластины при комнатной температуре в течение одного-двух дней. Наконец, используйте четкий плоский линейку и стерео микроскоп для измерения радиуса мицелия в каждой пластине до ближайшего миллиметра.
В этом протоколе экстракты из живых компостов подавляли рост R.solani значительно больше, чем автоклавные образцы, демонстрируя, что эффект был микробным, а не на основе питательных веществ. Подавление измеряется как снижение роста по сравнению с автоматическим управлением. На рост не повлияла продолжительность созревания или лечения компоста.
Рост был значительно повлиян на методом компоста и ингридиентами рецепта, специфически с vermicompost, процессами windrow, и рецептами с корой твёрдой древесины. После его разработки этот метод может стать кандидатом на коммерческую сертификацию компоста на противоукоренные свойства.
