我们的方案提出了一种新的内脑动脉闭塞技术在大鼠,以帮助研究中风后抑郁症的发展机制,并找到更有效的治疗方法。我们技术的主要优点是它能够减少体重变化、脑水肿和梗塞体积的变异性,并最大限度地减少与手术相关的死亡。在确认雄性300至350克Sprague Dawley大鼠对尾部挤压缺乏反应后,将动物放在37摄氏度的加热板上,并使用直肠探针监测核心体温。
将软膏涂抹在动物的眼睛上,剃掉颈部的头发。然后,用70%的酒精氯己丁对裸露的皮肤进行消毒,并在按照标准技术进行遮挡之前用无菌手术窗帘盖住大鼠。为了获得神经严重性评分,将一只被遮挡的老鼠放在平坦的表面上,让动物自由移动。
一分钟后,用尾巴轻轻拉老鼠,对动物的步态反应进行分级。要测量梗塞体积,请以每英寸分辨率 1,600 点扫描准备好的染色脑片,并裁剪并标准化所有图像的规模。然后,将标准化图像加载到适当的图像分析软件程序中,并使用跟踪工具测量连续六个两毫米切片中标记的苍白区域,以确定梗塞大小占整个大脑切片的百分比。
手术后30至33天,将动物转移到单个笼子里一个封闭、安静、光控制的房间,并在每个笼子里放置一个装有100毫升1%蔗糖溶液的瓶子,24小时。第二天,取出瓶子以及食物和饮用水12小时。在剥夺期结束时,将一瓶含有100毫升1%蔗糖溶液的瓶子和一瓶含有100毫升自来水的酒放入每个笼子4小时。
然后,记录蔗糖溶液的体积和消耗的水,以便计算每种动物的蔗糖偏好的亲和力。对于波尔索尔特的强制游泳测试,手术后30至33天,首先将每只老鼠放在一个垂直有机玻璃瓶中,里面装着80厘米的25摄氏度水,15分钟。在习惯期结束时,让大鼠在32摄氏度的加热外壳中干燥15分钟,然后将动物返回到其家庭笼子。
第二天,将大鼠返回到圆柱体最后五分钟,记录五分钟的测试,以便计算在此期间的固定时间的总持续时间。组织学分析显示,与假对照组的动物相比,在MCAO后脑总体积中,有统计学意义的梗塞体积。与假对照组相比,实验动物也观察到具有统计学意义的脑水肿。
MCAO动物在手术后50分钟、24小时和7天时,与假操作动物相比,神经性能较低。MCAO大鼠的蔗糖的消耗量也明显较低,与假操作的动物相比,在波萨尔特的强迫游泳试验中,其不动时间也更长。这是行为中风研究的重要模型,可以作为评估未来疗法或提供有关治疗物质疗效的关键临床前数据的工具。