Наш протокол предлагает новый метод окклюзии медиальной мозговой артерии у крыс, чтобы помочь изучить механизм развития после инсульта депрессии и найти более эффективную терапию. Основным преимуществом нашей техники является ее способность уменьшать изменчивость в изменениях веса, отеке мозга и инфаркте, а также минимизировать связанные с процедурой смерти. После подтверждения отсутствия ответа на щепотку хвоста у самца 300-350-граммовой крысы Спраг Доули поместите животное на 37 градусов по Цельсию нагревательной пластины и использовать ректальный зонд для мониторинга температуры тела ядра.
Нанесите мазь на глаза животного и побрите волосы с шеи. Затем дезинфицировать открытые кожи с 70 процентов алкоголя хлоргексидин, и покрыть крысу стерильной хирургической драпировки перед выполнением окклюзии в соответствии со стандартными методами. Чтобы получить неврологический балл тяжести, поместите occluded крысы на плоскую поверхность и позволяют животному свободно передвигаться.
Через минуту осторожно потяните крысу назад за хвост и оклассимите реакцию животного на походку. Чтобы измерить объем инфаркта, сканируйте подготовленные окрашенные ломтики мозга по 1600 на 1600 точек на дюйм и обрежьте и стандартизируйте шкалу для всех изображений. Затем загрузите стандартизированные изображения в соответствующую программу анализа изображений и используйте инструмент отслеживания для измерения области отмеченной бледности шестью последовательными двухмиллиметровыми ломтиками, чтобы определить размер инфаркта в процентах от всего среза мозга.
Через 30-33 дня после операции перенесите животных в закрытую, тихую, светоухозную комнату в отдельных клетках и поместите бутылку, содержащую 100 миллилитров раствора 1% сахарозы, в каждую клетку в течение 24 часов. На следующий день, удалить бутылки, а также пищу и питьевую воду в течение 12 часов. В конце периода лишения поместите одну бутылку, содержащую 100 миллилитров раствора 1% сахарозы и одну бутылку, содержащую 100 миллилитров водопроводной воды в каждую клетку в течение четырех часов.
Затем завещайте объем раствора сахарозы и потребляемой воды, чтобы вычислить сродство к предпочтениям сахарозы для каждого животного. Для принудительного плавания тест Porsolt, от 30 до 33 дней после операции, первое место каждой крысы в вертикальном плексигласа цилиндр, содержащий 80 сантиметров 25 градусов по Цельсию воды в течение 15 минут. В конце периода привыкания, дайте крысе высохнуть в течение 15 минут в нагретом корпусе при 32 градусах по Цельсию, прежде чем вернуть животное в свою домашнюю клетку.
На следующий день верните крысу в цилиндр в течение последних пяти минут, записав пятиминутный тест, позволяющий вычислить общую продолжительность неподвижности в течение этого периода. Гистологический анализ показывает статистически значимый объем инфаркта в процентах от общего объема мозга после MCAO по сравнению с животными в группе фиктивного контроля. Статистически значимый отек мозга также наблюдается у экспериментальных животных по сравнению с группой контроля обмана.
MCAO животные демонстрируют более низкие неврологические показатели по сравнению с фиктивных животных на 50 минут, 24 часов и семь дней после операции. Крысы MCAO также потребляют значительно меньшее количество сахарозы и проявляют более длинную неподвижность во время испытаний принудительного плавания Porsalt по сравнению с фиктивными животными. Это важная модель для поведенческих исследований инсульта и может служить инструментом для оценки будущих методов лечения или предоставления критических доклинических данных об эффективности терапевтических веществ.
