Nosso protocolo propõe uma nova técnica de oclusão da artéria cerebral medial em ratos para ajudar a estudar o mecanismo de desenvolvimento da depressão pós-acidente vascular cerebral e encontrar uma terapia mais eficiente. A principal vantagem de nossa técnica é sua capacidade de reduzir a variabilidade em alterações de peso, edema cerebral e volume de infarto, e minimizar mortes relacionadas ao procedimento. Depois de confirmar a falta de resposta ao aperto de cauda em um rato Desarmado macho de 300 a 350 gramas, coloque o animal em uma placa de aquecimento de 37 graus Celsius e use uma sonda retal para monitorar a temperatura corporal do núcleo.
Aplique pomada nos olhos do animal e raspe o cabelo do pescoço. Em seguida, desinfete a pele exposta com 70% de clorexidina alcoólica, e cubra o rato com a cortina cirúrgica estéril antes de realizar a oclusão de acordo com as técnicas padrão. Para obter o escore de gravidade neurológica, coloque um rato ocluído em uma superfície plana e permita que o animal se mova livremente.
Depois de um minuto, puxe suavemente o rato para trás pela cauda e a grade da resposta de marcha do animal. Para medir o volume de infarto, escaneie as fatias cerebrais manchadas preparadas em uma resolução de 1.600 por 1.600 pontos por polegada e corte e padronize a escala para todas as imagens. Em seguida, carregue as imagens padronizadas em um programa de software de análise de imagem apropriado e use uma ferramenta de rastreamento para medir a área de palidez marcada em seis fatias consecutivas de dois milímetros para determinar o tamanho do infarto como uma porcentagem de toda a fatia cerebral.
30 a 33 dias após a cirurgia, transfira os animais para uma sala fechada, silenciosa e controlada pela luz em gaiolas individuais, e coloque uma garrafa contendo 100 mililitros de solução de 1% de sacarose em cada gaiola por 24 horas. No dia seguinte, retire as garrafas, bem como a comida e a água potável por 12 horas. Ao final do período de privação, coloque uma garrafa contendo 100 mililitros de solução de 1% de sacarose e uma garrafa contendo 100 mililitros de água da torneira em cada gaiola por quatro horas.
Em seguida, registo o volume da solução de sacarose e da água consumida para permitir o cálculo da afinidade com a preferência por sacarose para cada animal. Para o teste de natação forçada de Porsolt, 30 a 33 dias após a cirurgia, primeiro lugar cada rato em um cilindro de plexiglass vertical contendo 80 centímetros de água celsius de 25 graus por 15 minutos. Ao final do período de habituação, permita que o rato seque por 15 minutos no recinto aquecido a 32 graus Celsius antes de devolver o animal à gaiola de origem.
No dia seguinte, devolva o rato ao cilindro por cinco minutos finais, registrando o teste de cinco minutos para permitir o cálculo da duração total da imobilidade durante esse período. A análise histológica revela um volume de infarto estatisticamente significativo como uma porcentagem do volume total do cérebro pós-MCAO quando comparado com animais do grupo de controle falso. Um edema cerebral estatisticamente significativo também é observado nos animais experimentais em comparação com o grupo de controle falso.
Animais MCAO demonstram desempenho neurológico mais baixo em comparação com animais operados por vergonha em 50 minutos, 24 horas e sete dias após a cirurgia. Os ratos de MCAO também consomem uma quantidade significativamente menor de sacarose e exibem uma imobilidade mais longa durante os testes de natação forçada de Porsalt em comparação com os animais operados por farsa. Este é um modelo importante para estudos de avc comportamental e poderia servir como uma ferramenta para avaliar terapias futuras ou fornecer dados pré-clínicos críticos sobre a eficácia de substâncias terapêuticas.
