הפרוטוקול שלנו מציע טכניקה חדשה של העורק המוחי המדיאלי בחולדות כדי לעזור ללמוד את המנגנון של התפתחות דיכאון לאחר שבץ ולמצוא טיפול יעיל יותר. היתרון העיקרי של הטכניקה שלנו הוא היכולת שלה להפחית את השונות בשינויים במשקל, בצקת במוח, נפח אוטם, ולמזער מקרי מוות הקשורים להליך. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת זנב בעכבר זכר 300 עד 350 גרם ספראג דאולי, מניחים את החיה על צלחת חימום 37 מעלות צלזיוס ולהשתמש בדיקה רקטלי לניטור טמפרטורת הגוף הליבה.
יש למרוח משחה על עיני החיה ולגילוח את השיער מהצוואר. לאחר מכן, לחטא את העור החשוף עם 70 אחוז אלכוהול chlorhexidine, ולכסות את החולדה עם וילון כירורגי סטרילי לפני ביצוע העורק על פי טכניקות סטנדרטיות. כדי לקבל את ציון החומרה הנוירולוגית, מניחים חולדה occluded על משטח שטוח ולאפשר את החיה לנוע בחופשיות.
לאחר דקה אחת, משוך בעדינות את החולדה לאחור בזנב ודרג את תגובת ההליכה של החיה. כדי למדוד את עוצמת הקול האוטמת, סרוק את פרוסות המוח המוכתמות המוכנות ברזולוציה של 1, 600 על 1, 600 נקודות לאינץ' וחתוך ותקן את קנה המידה עבור כל התמונות. לאחר מכן, טען את התמונות הסטנדרטיות לתוכנה מתאימה לניתוח תמונה ולהשתמש בכלי מעקב כדי למדוד את האזור של חיוורון מסומן בשש פרוסות רצופות של שני מילימטרים כדי לקבוע את גודל האוטם כאחוז מפרוסת המוח כולה.
30 עד 33 ימים לאחר הניתוח, מעבירים את בעלי החיים לחדר סגור, שקט ומבוקר אור בכלובים בודדים, ומעבירים בקבוק המכיל 100 מיליליטר של תותב סוכרוז אחד לכל כלוב למשך 24 שעות. למחרת, להסיר את הבקבוקים, כמו גם את האוכל ומי שתייה במשך 12 שעות. בתום תקופת הקיפוח, מניחים בקבוק אחד המכיל 100 מיליליטר של תותב סוכרוז 1 ובקבוק אחד המכיל 100 מיליליטר של מי ברז לתוך כלוב במשך ארבע שעות.
לאחר מכן, להקליט את הנפח של פתרון סוכרוז ומים נצרך כדי לאפשר חישוב של הזיקה כדי sucrose העדפה עבור כל בעל חיים. למבחן השחייה הכפויה של פורסולט, 30 עד 33 ימים לאחר הניתוח, יש למקם תחילה כל חולדה בצילינדר פרספקס אנכי המכיל 80 ס"מ של 25 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. בתום תקופת ההרגעה, אפשרו לחולדה להתייבש במשך 15 דקות במתחם המחומם ב-32 מעלות צלזיוס לפני החזרת החיה לכלוב הביתי שלה.
למחרת, להחזיר את החולדה לתוך הצילינדר במשך חמש דקות אחרונה, הקלטת הבדיקה חמש דקות כדי לאפשר חישוב של משך הזמן הכולל של חוסר תנועה במהלך תקופה זו. ניתוח היסטולוגי חושף נפח אוטם מובהק סטטיסטית כאחוז מנפח המוח הכולל לאחר MCAO בהשוואה לבעלי חיים בקבוצת הביקורת המזויפת. בצקת מוחית מובהקת סטטיסטית נצפית גם בבעלי החיים הניסיוניים בהשוואה לקבוצת הביקורת המזויף.
בעלי חיים MCAO להפגין הופעות נוירולוגיות נמוכות יותר בהשוואה לבעלי חיים המופעלים על ידי זיוף ב 50 דקות, 24 שעות, ושבעה ימים לאחר הניתוח. חולדות MCAO גם צורכות כמות נמוכה משמעותית של סוכרוז ומציגות חוסר תנועה ארוך יותר במהלך מבחני השחייה הכפויה של פורסלט בהשוואה לבעלי החיים המופעלים על ידי זיופים. זהו מודל חשוב למחקרי שבץ התנהגותי והוא יכול לשמש ככלי להערכת טיפולים עתידיים או מתן נתונים פרה-קליניים קריטיים על היעילות של חומרים טיפוליים.
