该协议描述了如何应用预先瞄准的方法在小鼠模型中的癌症异种仪的靶向放射治疗。预靶点放射性免疫疗法或PRIT允许我们分别注射抗体和放射性利甘，并允许两者使用点击化学在体内结合。当我们使用结肠直肠癌的Xenograph模型来呈现PRIT时，该技术可以应用于任何表面抗原靶向抗体。
重要的是要选择一种抗原，不迅速内化或广泛脱落，因为这些可以降低方法的功效。合成 huA33-TCO 首先在 1.7 毫升微离心管中，在干甲基甲酰胺中准备 125 微升溶液，每毫升 TCO-NHS 为 40 毫克。该溶液可等值并冷冻在80摄氏度，供将来实验使用。
在另外一个1.7毫升的微离心管中，每毫升5毫克的huA33溶液在一毫升磷酸盐缓冲盐水中。使用0.1摩尔碳酸钠的小等分，将抗体溶液的pH调至8.8至9.0之间。使用 pH 纸或带微电子的 pH 计来监控 pH 值，并注意 pH 值不超过 9.0。
在抗体溶液中加入与 TCO-NHS 40 摩尔等价对应的体积。为了防止疏水性 TCO-NHS 的降水，请缓慢地加入，并搅拌。允许在热混合器上以25摄氏度的温度下孵育一小时，并轻微搅拌。
在使用预包装的一次性尺寸排除脱盐柱净化 huA33-TCO 免疫结合之前，请平衡供应商描述的尺寸排除柱，以去除储存过程中柱中存在的任何防腐剂，这通常涉及用与柱体积对应的 PBS 体积清洗柱五次。将反应混合物添加到大小排除列中，注意反应混合物的体积。反应混合物进入柱后，添加适当量的PBS，使向柱中添加溶液的总体积达到2.5毫升。
使用两毫升 PBS 作为吸水器收集产品。使用紫外光对分光光度计监测波长为 280 纳米，测量 huA33-TCO 的浓度。如果需要具有较高浓度免疫结合物的溶液，则使用离心过滤单元（按照制造商的指示切断 50，000 分子量）浓缩 huA33-TCO 溶液。
将已完成的 huA33-TCO 免疫结合储存在黑暗中 4 摄氏度。如果将来使用超过四天，就把它储存在黑暗中80摄氏度。在1.7毫升离心管中加入200微升0.25摩尔铵醋酸铵缓冲液调整为pH5.5。
将所需量的卢泰因-177氯化物添加到缓冲液中。增加的量将取决于实验中受试者的数量和被施用的放射性剂量。在DMSO中加入特特拉津PEG7-DOTA加入放射性混合物中。
添加的金额取决于要测试的受试者的数量。让溶液在37摄氏度下孵育20分钟。使用无线电即时薄层色谱（以 50 毫摩尔 EDTA pH 5.5 作为移动相）验证无线电标记是否完整。
标有 Luteteium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine 的标签将保留在基线上，而免费的 Luteteium-177 将由 EDTA 协调，并带溶剂前部旅行。皮下肿瘤的放置不干扰您的约束技术至关重要。我建议把它们放在侧翼侧，这是对面的你约束的手。
自从我用左手约束，我选择把肿瘤放在右侧。用结肠直肠癌Xenograph对雌性裸体小鼠进行排序，使每个队列的平均肿瘤体积大致相等。为此，请将动物识别号、耳口图案和肿瘤体积列在电子表格程序的三列中。
将数据从最小到最大的肿瘤体积进行排序。在第四列中为每个动物分配一个笼子编号。以蛇形图案循环通过笼子，直到所有动物都被分配一个笼子。
分配保持架后，按保持架编号对数据进行排序。在PBS中用1%牛血清白蛋白预处理的注射器中注射150微升huA33-TCO溶液的免疫结合抽发剂量，并将其储存在冰上。注射放射性利甘，首先在150微升0.9%无菌盐水中抽出剂量，其中含有放射性标记的Tetrazine-PEG7-DOTA的1.1摩尔等价，相对于huA33-TCO施用量。
使用卡钳测量长方形肿瘤最长的一侧以及垂直于长度的宽度。在平衡上称量每只鼠标，以跟踪体重增加或体重减轻。最后，使用椭圆体体积公式计算体积，假设高度与宽度大致相等。
这里展示的是体内预距与huA33-TCO和Luteteium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine在携带皮下SW1222人类结肠直肠肿瘤的生物分布。所有注射间隔在肿瘤组织中产生高活性浓度，在健康器官中产生低活性浓度。24小时注射间隔提供注射后120小时的最高肿瘤吸收。
根据这些发现，为随后的纵向治疗研究选择了24小时的间隔。这里展示的是五组携带皮下SW1222肿瘤的小鼠的纵向治疗研究，这些小鼠以平均肿瘤体积描述为时间函数，肿瘤体积与初始体积一样作为时间函数而正常化。与对照组相比，实验组的反应有明显差异。
虽然只接受目标前放射性免疫治疗策略一个组成部分的小鼠的肿瘤继续无节制地生长，但接受完全目标前放射性免疫疗法方案的小鼠的肿瘤停止生长并最终缩小。重要的是，没有观察到有毒的副作用，所有动物的重量保持在20%的初始质量。令人吃惊的是，实验组的实验鼠在调查结束时有完美的存活记录。
当尝试这个程序时，它是最重要的，准确和可重复测量肿瘤。与放射性合作时，请咨询您机构的辐射安全官员，以制定安全的协议和设施。适当的安全控制将限制您的暴露并避免污染。
与传统的放射免疫疗法相比，预目标对背景器官的辐射剂量更低。通过分享这个协议，我们希望其他人能够测试他们自己的模型和想法，这将导致新的和令人兴奋的进展，病人治疗。
