线粒体功能对细胞平衡至关重要，氧气消耗率是线粒体健康的决定性指标。该协议提供了分析C.elegans中氧气消耗率的详细说明。该协议利用实时移动C.elegans提供线粒体功能的法律测量。
提升隔离线粒体需求，这一步骤可能影响线粒体的完整性。首先，将所需遗传背景的L4幼虫转移到线虫生长介质或NGM板上新鲜播种的大肠杆菌草坪上。每个应变至少使用两个 100 mm 或三个 60 mm 板。
在适当的生长温度下孵育蠕虫三到四天，或直到板与大量的鸡蛋和麦格虫集中。每100毫米线虫板用大约6毫升的M9缓冲液将鸡蛋和蠕虫从盘子里洗掉。使用玻璃牧场移液器，将鸡蛋和蠕虫转移到每个菌株的15毫升离心管中。
在6，180克下旋转这些管三分钟。离心后，吸出M9缓冲液，只保留动物和蛋丸。在每个管中加入三到四毫升的漂白剂溶液，间歇性涡流6分钟。
然后，加入M9缓冲液填充每个管，并在6，180克旋转一分钟。吸上一液，用M9重复洗涤三次。洗涤后，将鸡蛋颗粒移动到含有约9毫升M9缓冲液的新鲜15毫升管中。
在 20 摄氏度下加热 16 至 48 小时，使新孵化的蠕虫同步。在将这些管子在 6，180 g 下旋转 1.5 分钟后，将同步的 L-1 动物放在单个 NGM 板上的 OP50 新鲜种子草坪上。将板保持在20摄氏度，直到动物在大约42小时后到达L-4幼虫阶段。
此时，使用铂金选择将L4幼虫移至OP50种子NGM板，每毫升FUdR含有0.5毫克，以防止产生后代。通过将 200 微升蒸馏水添加到板上的每一个井中，使传感器墨盒水合一，确保传感器探头被淹没。在室温下隔夜存放板。
关闭呼吸计界面内的加热元件。将机器存放在 15 摄氏度的培养箱内可降低机器内部的核心温度，并防止动物在检测过程中过热。经过一夜的孵化，移液器取出并丢弃用于滋润传感器探头的蒸馏水，并在每井中用200微升的校准液代替。
将 FCCP 库存溶液稀释至蒸馏水中的 100 微摩尔 FCCP。然后，将稀释溶液的 20 微升添加到传感器墨盒中的喷射端口 A 中。将 22 微升 400 毫摩尔钠 azides 添加到传感器墨盒的喷射端口 B 中。
现在，打开呼吸仪。在主屏幕上，选择"开始"，将显示模板页面。在模板页上，选择空白"或以前设计的模板。
将显示组页面。在组页上，选择井 A 和 H 作为背景井，根据实验计划将剩余的六口井分配到适当的组中。通过单击右下角的箭头访问协议页，并确保选择平衡、基底和注入一和两个按钮。
调整基础OCR的读数数以及最大OCR和非线粒体OCR。选择右下角的箭头。将显示加载传感器墨盒板的提示。
按照提醒提示屏幕上的说明，确保传感器墨盒板以正确的方向加载。现在，重新测量仪将平衡墨盒。在细胞板的八个孔和周围储液罐中，每口加入200微升M9缓冲液。
从每个菌株中挑选大约 100 个蠕虫到非种子 NGM 板上，并允许休息两到三分钟。然后，用M9缓冲液将铂金采摘的端子弄湿，将20岁同步动物放入B型水井到G型，使背景井 A和H空空。现在，单击呼吸仪软件上的"确定"以弹出包含校准缓冲液的板。
从呼吸仪上拆下板，将传感器盒留在仪器内。用含有动物的盘子替换卡钳板。加载板并通过撞击关闭车门，然后让检测运行。
检测运行完成后，按照屏幕上的提示删除电池板和传感器盒。将闪存驱动器插入 USB 端口以保存运行数据战格式。拆下传感器墨盒，让动物在井底安顿下来约两分钟。
将细胞板放在立体解剖显微镜下，计算每孔的动物数量。打开分析软件，然后打开规范化选项卡，将耗氧率与动物数量标准化。在"修改"选项卡下为各个组应用适当的级别，并导出该文件作为棱镜文件进行进一步分析。
前五个测量值的平均值是基础 OCR。添加 FCCP 后五个测量值的平均值为最大 OCR。最后，添加亚兹德钠后最后五次测量的平均数是非线粒体呼吸率。
由于钙失调会导致线粒体功能改变，因此对sel-12突变体和野生类动物的OCR进行测量，以检查sel-12突变对线粒体功能和健康的影响。野生类动物的底法OCR率一直低于每分钟5个皮毛，每个蠕虫。虽然所有三个菌株的sel-12突变体显示显著升高的OCR，大约每分钟7个皮科，每个蠕虫。
加入FCCP后，野生类型的OCR和sel-12突变体如预期的那样增加。野生类动物显示，每只蠕虫每分钟最大OCR约为7个象形虫。而 sel-12 突变体每分钟有大约 10 个象形虫，每个蠕虫。
在此测定中使用活体、喂养良好和异步动物，并避免将鸡蛋或尸体转移到测定井中。此外，仪器的内部温度不应超过 25 摄氏度。漂白剂、FCCP、FudR 和酸钠是有毒的。
因此，在准备库存溶液和药物装载时，应注意佩戴防护手套。
