转移和固定果蝇可能具有挑战性。使用这些技术和工具,您可以使常规飞行传输和固定更容易。制造这些工具所需的材料价格低廉,易于获得。
咨询和教学或研究实验室可以让他们轻松。在开始此过程之前,使用电动搅铁在两个海绵塞的中心打一个洞,该孔大于用于传输苍蝇的小瓶的内部直径。接下来,用锋利的刀将一毫米小管尖横向切成两半,将第二个一毫米微管尖端的尖端切开1.5厘米。
将两个移液器尖端的碎片与通用粘合剂粘合在一起。然后将拉长的微管尖端插入一个海绵塞中,并将漏斗插入另一个海绵塞中,然后用单独的 100 微升微离心管盖住移液器尖端。要准备微插针,请选择与符合人体工程学机械铅笔铅填充直径的昆虫针,并使用一对钳子切断针脚的独眼末端。
然后将切口文件平放,然后用修改后的针脚替换铅笔中的引线。要准备一个果蝇蛋收集箱,使用捕捉切割机切割软塑料500毫升饮料瓶约2/3下瓶,并使用胶带固定卡纸条周围的60毫米直径的苹果汁板。要将成年苍蝇转移到小瓶之间,请仔细检查漏斗塞中的漏斗杆和尖端塞中的移液器尖端。
轻点第一瓶中的苍蝇,用尖端塞子更换插头。用漏斗塞子插入第二个小瓶,并将第一个小瓶放在第二个小瓶上,以便将尖端塞的移液器尖端插入漏斗塞的漏斗开口。敲开第一个小瓶的边缘,让苍蝇从移液器尖端滑出,并通过漏斗的茎滑入第二个小瓶。
如果第一瓶中的任何旧食物变得不那么紧凑,当小瓶倒置时掉落,将第二小瓶倒置在第一小瓶上,让苍蝇爬进第二小瓶。转移所需苍蝇数量后,将尖端塞从漏斗塞接器中分离,然后用原始插头更换尖端塞。然后用适当的插头更换第二瓶中的漏斗塞。
对于成年果蝇通过冷却固定,放置一个可重新冷冻的冰袋,在零下80摄氏度下冷藏至少24小时,在室温下,并在碎冰中冷却空小瓶。20分钟后,稍微润湿了一块无菌医用纱布,比冰袋略小,有自来水。将纱布放在冰袋表面,使纱布紧粘附在冰袋表面。
接下来,使用一块吸水纸擦拭冰冷空瓶中的水,然后将需要固定成根的成年苍蝇转移到小瓶中。当所有的苍蝇都转移后,盖住冰瓶,将小瓶敲碎冰两到三次,将所有苍蝇敲击到小瓶的底部。苍蝇会立即被固定。
将小瓶放回冰上一分钟,然后将苍蝇倒在覆盖着冰袋的纱布上。然后用画笔来展开重叠的苍蝇。在立体显微镜下检查固定苍蝇,从解剖显微镜上取下舞台夹,用一块塑料薄膜覆盖舞台。
将冰袋放在舞台上,并打开显微镜的冷光源。然后聚焦立体显微镜,移动冰袋,直到冰飞可以清楚地看到。观察苍蝇后,通过机翼将每只苍蝇转移到一个新的文化小瓶中。
微波牺牲成年苍蝇计数,排序,或丢弃,转移感兴趣的成年苍蝇到空小瓶,并覆盖小瓶与培养皿。接下来将小瓶倒放在微波炉内,并在标准温度下加热小瓶80秒。死苍蝇会掉到培养皿里。
戴上防护工作手套,将苍蝇倒入白色纸卡上,并在立体显微镜下转移卡,用先前准备的微切除针头进行检查和/或计数。苍蝇可以在考试结束时被丢弃。对于瓶形鸡蛋收集笼转移,插入改良的鸡蛋收集笼瓶到苹果汁板。
使用石蜡薄膜条密封两个组件周围的接头。接下来用漏斗塞塞笼,将培养小瓶倒置到塞子上。然后将苍蝇加入笼子,通过漏斗塞子,然后用培养小瓶塞塞住笼子。
要更换食物,请将苍蝇转移到空小瓶中,然后再用新盘子更换苹果汁盘。然后把苍蝇从小瓶传回笼子。在鸡蛋收集结束时,将苍蝇转移到空小瓶中,然后再将苍蝇转移到几个新的培养小瓶中。
使用这种经过改良的冷麻醉方法,苍蝇在冰袋上保持不动,吸收冷凝水的医用纱布使苍蝇保持干燥,并可以轻松对冷冻苍蝇进行表型或处理。在25摄氏度的室温下,冰冷硬冰袋的表面温度急剧上升,从零下19摄氏度到零下2摄氏度,在20分钟内,迅速到达一个高原,对老苍蝇和新孵化的苍蝇都是安全的。与过度空化或深度冷冻相比,微波介电加热是一种更快、更方便杀死成年苍蝇的剂。
与过度以太苍蝇类似,微波苍蝇从身体以直角伸展翅膀。一般来说,被微摇杀死的飞尸体的重量明显比被乙醚或冷冻杀死的飞尸体轻,但热量不会扭曲体型,而且尸体不会变得脆脆或笨拙。在将纱布压在冰袋上之前,请务必从湿润的纱布中挤出尽可能多的水,并确保纱布紧粘附在冰袋上。
在将苍蝇转移到小瓶之前,将冷凝水从冰冷的空瓶上擦掉也很重要。