フルーツハエを移し、固定するのは難しいかもしれません。これらの手法とツールを使用すると、定期的なフライ転送と固定化を簡単に行うことができます。これらのツールを作るために必要な材料は安価で入手しやすいです。
アドバイザリーと教育や研究室は、簡単にそれらを作ることができます.この手順を開始する前に、電気ソドラーアイロンを使用して、ハエを移動するために使用されるバイアルの内径よりも大きい2つのスポンジプラグの中心に穴を開けます。次に、鋭利なナイフを使用して1ミリメートルのマイクロピペットチップを横に半分に切断し、2番目の1ミリメートルマイクロピペットチップの先端から1.5センチメートルを切断します。
2つのピペットの先端の部分を万能接着剤と一緒に接着します。その後、細長いマイクロピペットチップを1つのスポンジプラグに挿入し、他のスポンジプラグに漏斗を挿入し、ピペットチップを個々の100マイクロ遠心分離チューブでキャップします。マイクロディセクション針を準備するには、人間工学に基調的なメカニカルペンシルの鉛リフィルの直径に一致する昆虫ピンを選択し、ペンチのペアを使用してピンの片目の端を切断します。
次に、カットを平らにファイルし、鉛筆のリードを修正されたピンに置き換えます。ショウジョウバエの卵コレクションケースを準備するには、スナップカッターを使用して柔らかいプラスチック製の500ミリリットルのドリンクボトルをボトルの約2/3下に切り、テープを使用して直径60ミリメートルのリンゴジュースプレートの周りにカードペーパーのストリップを固定します。バイアルの間に成体のハエを移すには、漏斗ストッパーの漏斗の茎と先端ストッパーのピペットの先端を注意深く点検する。
最初のバイアルでハエをタップダウンし、先端ストッパーでプラグを交換します。2番目のバイアルに漏斗ストッパーを差し込み、チップストッパーのピペット先端端が漏斗ストッパーの漏斗開口部に挿入されるような2番目のバイアルの上に1番目のバイアルを置きます。最初のバイアルの端をノックして、ハエがピペットチップから抜け出し、漏斗の茎を通って2番目のバイアルに入るようにします。
最初のバイアルの古い食べ物がコンパクトで、バイアルが反転したときに落ちる場合は、最初のバイアルの上に2番目のバイアルを反転させ、ハエが第2のバイアルに這い上がるようにします。必要な数のハエが転送されたら、チップストッパーを漏斗ストッパーから分離し、チップストッパーを元のプラグに交換します。次に、2番目のバイアルの漏斗ストッパーを適切なプラグに交換します。
冷やして成体フルーツフライを固定化するには、少なくとも24時間マイナス80度で室温で冷やされた再解放可能なアイスパックを置き、砕いた氷の中で空のバイアルを冷やします。20分後、無菌ではない医療ガーゼをわずかに湿らせ、冷たいアイスパックよりもわずかに小さく、流水で湿らせた。ガーゼがパックの表面に密接にしがみ合うように、ガーゼをアイスパックの表面に置きます。
次に、吸収性紙を使用して、冷蔵、空のバイアルから水を拭き取り、バイアルに固定化する必要がある成体のハエを移します。すべてのハエが移動したら、冷やしたバイアルを覆い、砕いた氷に対してバイアルを2〜3回ノックして、すべてのハエをバイアルの底までタップします。ハエはすぐに固定されます。
バイアルを氷の上に1分間戻してから、アイスパックを覆うガーゼにハエを注ぎます。その後、重なり合うハエを広げるためにペイントブラシを使用します。固定化されたハエをステレオ顕微鏡で調べるには、解剖顕微鏡からステージクリップを取り外し、プラスチックフィルムでステージを覆います。
アイスパックをステージに置き、可能な限り顕微鏡の冷たい光源をオンにします。次に、ステレオ顕微鏡を焦点を合わせ、冷たいハエがはっきりと見えるまでアイスパックを動かします。ハエを見た後、翼によって、新しい文化バイアルに各フライを転送します。
数え、選別、または廃棄のために大人のハエを電子レンジで犠牲にするには、目的の大人のハエを空のバイアルに移し、ペトリ皿でバイアルを覆います。次に、マイクロ波内のバイアルを反転させ、80秒間標準温度でバイアルを加熱します。死んだハエはペトリ皿に落ちるでしょう。
保護作業用手袋を着用し、ハエを白紙カードに注ぎ、ステレオ顕微鏡でカードを転送し、以前に準備したマイクロディセクション針で検査やカウントを行います。ハエは試験の終わりに捨てることができます。ボトル状の卵のコレクションケージの転送の場合は、リンゴジュースプレートに変更された卵コレクションケージボトルを挿入します。
パラフィンフィルムのストリップを使用して、2つの成分の周りに関節を密封します。次に、漏斗ストッパーでケージを差し込み、培養バイアルをストッパーに反転させます。次に、ハエを漏斗ストッパーを通してケージに加え、ケージを培養バイアルストッパーと差し込みます。
食べ物を変更するには、新しいプレートにリンゴジュースプレートを交換する前に、空のバイアルにハエを転送します。その後、バイアルからケージに戻ってハエを転送します。卵のコレクションの最後に、いくつかの新しい培養バイアルにハエを転送する前に空のバイアルにハエを転送します。
この修飾された冷たい麻酔法を使用して、ハエはアイスパック上で不動に保たれ、凝縮水を吸収する医療ガーゼはハエを乾燥させ、冷たいハエのフェノタイピングまたは取り扱いを容易にします。室温25度では、冷やされた硬いアイスパックの表面の温度が20分以内にマイナス19度からマイナス2度まで劇的に上昇し、古いハエと新しく孵化したハエの両方に安全な高原に急速に達します。マイクロ波誘電加熱は、過剰にエザリジングまたは深い凍結に比べて、成体ハエを殺すためにより速く、より便利な薬剤です。
オーバーエーテル化されたハエと同様に、マイクロ波ハエは体から直角に翼を伸ばします。一般的に、マイクロウェーブによって殺されたフライカーカスは、エーテルまたは凍結によって殺されたものよりも重量が著しく軽いが、熱は体の形を歪めず、死体はカリカリまたはターギッドにならない。湿らせたガーゼをアイスパックに押し込む前にできるだけ多くの水を絞り出し、ガーゼがアイスパックに密接にしがみついていることを確認してください。
また、ハエをバイアルに移す前に、冷やした空のバイアルから凝縮水を拭き取ることが重要です。
