Bu transfer ve meyve sinekleri immobilize zor olabilir. Bu teknikleri ve araçları kullanarak, rutin sinek transferi ve immobilizasyon daha kolay yapabilirsiniz. Bu araçları yapmak için gerekli malzemeler ucuz ve elde edilmesi kolaydır.
Danışmanlık ve öğretim veya araştırma laboratuvarı kolaylıkla yapabilirsiniz. Bu prosedüre başlamadan önce, sinekaktarmak için kullanılacak şişelerin iç çapı daha büyük iki sünger fişleri merkezlerinde bir delik yapmak için bir elektrikli isşif demir kullanın. Daha sonra, bir milimetrelik mikropipet ucunu ikiye keletip, ikinci bir milimetrelik mikropipet ucunun ucundan 1,5 santimetre kesmek için keskin bir bıçak kullanın.
Çok amaçlı bir yapıştırıcı ile birlikte iki pipet uçlarının parçaları tutkal. Daha sonra uzatılmış mikropipet ucunu bir sünger fişe takın ve diğer sünger fişe bir huni takın ve pipet uçlarını tek tek 100 mikrolitrelik mikrosantrifüj tüpleriyle kaplayın. Mikrodiseksiyon iğnelerini hazırlamak için, ergonomik mekanik kalemlerin kurşun dolumlarının çaplarına uyan böcek pimlerini seçin ve iğnelerin tek gözlü uçlarını kesmek için bir çift iğne kullanın.
Daha sonra kesikleri düz dosyalayın ve kalemlerdeki kurşunu değiştirilmiş iğnelerle değiştirin. Bir Drosophila yumurta toplama durumda hazırlamak için, bir yumuşak plastik 500 mililitrelik içecek şişesi yaklaşık 2 / 3 şişe aşağı kesmek için bir çırpıda kesici kullanın ve 60 milimetre çapında elma suyu plakası etrafında kart kağıt bir şerit güvenli bant kullanın. Yetişkin sinekleri şişeler arasında aktarmak için huni durdurucudaki huninin sapını ve uçlu stoperdeki pipetin ucunu dikkatlice kontrol edin.
İlk şişedeki sinekleri indirin ve fişi bir uç durdurucuyla değiştirin. İkinci şişeyi huni durdurucusuyla takın ve ilk şişeyi ikinci şişenin üzerine yerleştirin, ki uç durdurucunun pipet ucu ucu huni durdurucunun huni açılışına eklenir. Sineklerin pipet ucundan dışarı ve huninsap sapı ile ikinci şişe içine kayma izin vermek için ilk şişe nin kenarına vurun.
İlk şişedeki herhangi bir eski yiyecek daha az kompakt hale gelirse ve şişe ters çevrildiğinde düşerse, ikinci şişeyi ilk şişenin üzerine ters çevirin ve sineklerin ikinci şişeye girmesine izin verin. İstenilen sayıda sinek aktarıldığında, uç durdurucuyu huni durdurucusundan ayırın ve uç durdurucuyu orijinal fişle değiştirin. Daha sonra ikinci şişedeki huni durdurucuyu uygun bir fişle değiştirin.
Yetişkin meyve sinek immobilizasyon için soğutma, oda sıcaklığında, en az 24 saat boyunca eksi 80 derece santigrat soğutulmuş olan bir yeniden serbest leştirilebilir buz paketi yerleştirin ve ezilmiş buz boş bir şişe soğutun. 20 dakika sonra, biraz olmayan aseptik tıbbi gazlı bez bir parça nemlendirin, bu biraz soğuk buz paketi daha küçük, akan su ile. Gazlı bezin buz kütlesinin yüzeyine yerleştirin, böylece gazlı bez sürü yüzeyine sıkıca tutunur.
Daha sonra soğutulmuş, boş şişeden su silmek için emici kağıt bir parça kullanın ve şişe içine hareketsiz olması gereken yetişkin sinekler aktarmak. Tüm sinekler transfer edildiğinde, soğutulmuş şişenin üzerini kapatın ve şişenin dibine kadar tüm sineklere dokunmak için şişeyi ezilmiş buza 2-3 kez vurun. Sinekler hemen hareketsiz kalacak.
Buz paketi kapsayan gazlı bez üzerine sinekdökmeden önce bir dakika için buz üzerinde şişe geri yerleştirin. Sonra örtüşen sinekler yaymak için bir paintbrush kullanın. Bir stereo mikroskop altında hareketsiz sinekler incelemek için, diseksiyon mikroskop sahne klipleri kaldırmak ve plastik film bir parça ile sahne kapağı.
Buz paketini sahneye yerleştirin ve mikroskobun soğuk ışık kaynağını açık olarak açın. Sonra stereo mikroskobu odaklayın ve soğutulmuş sinekler açıkça görülene kadar buz paketini hareket ettirin. Sinekleri gördükten sonra, her bir sineği kanatla yeni bir kültür şişesine aktarın.
Geri sayım, sıralama veya atmak için yetişkin sineklerini mikrodalgada feda etmek için, yetişkin sineklerini boş bir şişeye aktarın ve şişeyi petri kabıyla kapatın. Sonraki bir mikrodalga içinde şişe ters ve 80 saniye boyunca standart sıcaklıkta şişe ısı. Ölü sinekler Petri kabına düşecek.
Koruyucu çalışma eldivenleri giyerek, sinekleri beyaz, kağıt kart üzerine dökün ve kartı daha önce hazırlanmış mikrodiskes iğneleri ile incelenmek ve/veya saymak için stereo mikroskop altında transfer edin. Sinekler sınav sonunda atılabilir. Şişe şeklindeki yumurta toplama kafes transferi için, değiştirilmiş yumurta toplama kafesi şişesini elma suyu tabağına takın.
İki bileşenetrafında ortak mühür parafin film bir şerit kullanın. Sonra kafesi huni durdurucuyla takın ve kültür şişesini stoperin üzerine ters çevirin. Sonra kültür şişesi stoper ile kafes takmadan önce, huni stoper aracılığıyla, kafese sinekekleyin.
Gıda değiştirmek için, yeni bir tabak ile elma suyu plakası değiştirmeden önce boş bir şişe sinekler aktarın. Sonra sinekleri şişeden kafese geri aktarın. Yumurta koleksiyonunun sonunda, birkaç yeni kültür şişeleri içine sinek aktarmadan önce boş bir şişe içine sinek transfer.
Bu modifiye chill anestezi yöntemi kullanılarak, sinekler buz paketi üzerinde hareketsiz tutulur ve yoğuşmalı suyu emen tıbbi gazlı bez sinekler kuru tutar ve fenotipleme veya soğutulmuş sineklerin kolayca işleme sağlar. 25 santigrat derece oda sıcaklığında, soğutulmuş, sert buz kütlesinin yüzeyinin sıcaklığı önemli ölçüde artar, eksi 19 santigrat derece eksi santigrat derece, eksi 20 dakika içinde, hızlı bir şekilde hem eski hem de yeni yumurtadan sinekler için güvenli bir plato ulaşan. Mikrodalga dielektrik ısıtma aşırı etherizing veya derin donma ile karşılaştırıldığında yetişkin sineköldürmek için daha hızlı, daha uygun bir ajandır.
Aşırı eterize sineklere benzer şekilde, mikrodalgada pişirilen sinekler kanatlarını vücuttan dik açılarla uzalar. Genellikle, mikrowaving tarafından öldürülen sinek karkas lar eter veya donma tarafından öldürülenlere göre önemli ölçüde hafiftir, ancak ısı vücut şeklini bozmaz ve leşler gevrek veya turgid olmaz. Buz torbasıüzerine basmadan önce nemlendirilmiş gazlı bezden mümkün olduğunca çok su sıktıktan ve gazlı bezin buz paketine sıkıca tutunduğundan emin olun.
Ayrıca şişe içine sinek ler aktarmadan önce soğutulmuş, boş şişe yoğunlaştırılmış su silmek için önemlidir.
