Il peut être difficile de transférer et d’immobiliser les mouches des fruits. En utilisant ces techniques et outils, vous pouvez faciliter le transfert et l’immobilisation des mouches de routine. Les matériaux nécessaires à la construction de ces outils sont peu coûteux et faciles à obtenir.
Le laboratoire consultatif et d’enseignement ou de recherche peut les faire facilement. Avant de commencer cette procédure, utilisez un fer à sodlering électrique pour faire un trou dans les centres de deux bouchons d’éponge qui sont plus grands que le diamètre interne des flacons qui seront utilisés pour transférer les mouches. Ensuite, utilisez un couteau pointu pour couper une pointe de micropipette d’un millimètre transversalement en deux et pour couper 1,5 centimètre de la pointe d’une deuxième pointe de micropipette d’un millimètre.
Collez les morceaux des deux pointes de pipette avec un adhésif tout usage. Insérez ensuite la pointe allongée de micropipette dans une prise d’éponge, et insérez un entonnoir dans l’autre prise d’éponge, et plafonnez les bouts de pipette avec les tubes individuels de microcentrifugeuse de 100 microlitres. Pour préparer les aiguilles de microdissection, sélectionnez des épingles à insectes qui correspondent aux diamètres des recharges de plomb des crayons mécaniques ergonomiques, et utilisez une paire de pinces pour couper les extrémités borgniques des broches.
Puis classez les coupes à plat, et remplacez le plomb dans les crayons par les broches modifiées. Pour préparer un étui de collecte d’œufs Drosophila, utilisez un coupe-bouchon pour couper une bouteille de boisson en plastique souple de 500 millilitres environ 2/3 dans la bouteille, et utilisez du ruban adhésif pour fixer une bande de papier de carte autour d’une plaque de jus de pomme de 60 millimètres de diamètre. Pour transférer les mouches adultes entre les flacons, vérifiez soigneusement la tige de l’entonnoir dans le bouchon de l’entonnoir et le bout de la pipette dans le bouchon de pointe.
Appuyez sur les mouches dans le premier flacon, et remplacer la fiche par un bouchon de pointe. Branchez le deuxième flacon à l’aide d’un bouchon en entonnoir et placez le premier flacon sur le deuxième flacon de sorte que l’extrémité pipette-pointe du bouchon de pointe soit insérée dans l’ouverture en entonnoir du bouchon en entonnoir. Frappez le bord du premier flacon pour permettre aux mouches de glisser hors de la pointe de la pipette et à travers la tige de l’entonnoir dans le deuxième flacon.
Si une vieille nourriture dans le premier flacon devient moins compacte et tombe lorsque le flacon est inversé, inverser le deuxième flacon sur le premier flacon, et permettre aux mouches de ramper dans le deuxième flacon. Lorsque le nombre souhaité de mouches a été transféré, séparez le bouchon de pointe du bouchon de l’entonnoir et remplacez le bouchon d’extrémité par la fiche d’origine. Remplacez ensuite le bouchon en entonnoir dans le deuxième flacon par une prise appropriée.
Pour l’immobilisation des mouches des fruits adultes par refroidissement, placez un sac de glace regelable, refroidi à moins 80 degrés Celsius pendant au moins 24 heures, à température ambiante, et refroidissez un flacon vide dans de la glace concassée. 20 minutes plus tard, humidifier légèrement un morceau de gaze médicale non aseptique, légèrement plus petite que la banquise réfrigérée, avec de l’eau courante. Placez la gaze sur la surface de la banquise de sorte que la gaze s’accroche étroitement à la surface de la meute.
Ensuite, utilisez un morceau de papier absorbant pour essuyer l’eau du flacon froid et vide, et transférer les mouches adultes qui doivent être immobilisées dans le flacon. Lorsque toutes les mouches ont été transférées, couvrez le flacon réfrigéré et frappez le flacon contre la glace concassée deux à trois fois pour tapoter toutes les mouches au fond du flacon. Les mouches seront immédiatement immobilisées.
Remettre le flacon sur la glace pendant une minute avant de verser les mouches sur la gaze qui recouvre la banquise. Ensuite, utilisez un pinceau pour étaler les mouches qui se chevauchent. Pour examiner les mouches immobilisées au microscope stéréo, retirez les clips de scène du microscope disséquant et couvrez la scène d’un morceau de film plastique.
Placez la banquise sur la scène et allumez la source de lumière froide du microscope disponible. Ensuite, concentrez le microscope stéréo et déplacez la banquise jusqu’à ce que les mouches réfrigérées puissent être vues clairement. Après avoir vu les mouches, transférez chaque mouche, par l’aile, dans un nouveau flacon de culture.
Pour sacrifier au micro-ondes les mouches adultes pour compter, trier ou jeter, transférer les mouches adultes d’intérêt dans un flacon vide, et couvrir le flacon avec une boîte de Petri. Ensuite, inverser le flacon à l’intérieur d’un four à micro-ondes, et chauffer le flacon à température standard pendant 80 secondes. Les mouches mortes tomberont dans la boîte de Petri.
Porter des gants de travail protecteurs, verser les mouches sur une carte blanche en papier et transférer la carte au microscope stéréo pour examen et/ou compter avec les aiguilles de microdissection préparées précédemment. Les mouches peuvent être jetées à la fin de l’examen. Pour le transfert de cage de collecte d’oeufs en forme de bouteille, insérez la bouteille modifiée cage de collecte d’oeufs dans la plaque de jus de pomme.
Utilisez une bande de film de paraffine pour sceller l’articulation autour des deux composants. Branchez ensuite la cage à l’aide d’un bouchon en entonnoir et inversez le flacon de culture sur le bouchon. Ajoutez ensuite les mouches à la cage, à travers le bouchon en entonnoir, avant de brancher la cage avec le bouchon de flacon de culture.
Pour changer les aliments, transférer les mouches dans un flacon vide avant de remplacer l’assiette de jus de pomme par une nouvelle assiette. Ensuite, transférez les mouches du flacon vers la cage. À la fin de la collecte des œufs, transférer les mouches dans un flacon vide avant de transférer les mouches dans plusieurs flacons de nouvelle culture.
En utilisant cette méthode d’anesthésie par refroidissement modifiée, les mouches sont maintenues immobiles sur la banquise, et la gaze médicale qui absorbe l’eau condensante maintient les mouches au sec et permet le phénotypage ou la manipulation des mouches réfrigérées avec facilité. À une température ambiante de 25 degrés Celsius, la température de la surface d’une banquise froide et dure augmente considérablement, de moins 19 degrés Celsius à moins deux degrés Celsius, en moins de 20 minutes, atteignant rapidement un plateau sûr pour les mouches anciennes et nouvellement écloses. Le chauffage diélectrique par micro-ondes est un agent plus rapide et plus pratique pour tuer les mouches adultes par rapport à la suréthisation ou au gel profond.
À l’semblable aux mouches suréthisées, les mouches à micro-ondes étendent leurs ailes à angle droit du corps. En général, les carcasses de mouches tuées par micro-ondes ont un poids beaucoup plus léger que celles tuées par éther ou par congélation, mais la chaleur ne déforme pas la forme du corps, et les carcasses ne deviennent pas croquantes ou turgid. Assurez-vous de presser autant d’eau de la gaze humidifié que possible avant de la presser sur la banquise et de vous assurer que la gaze s’accroche étroitement à la banquise.
Il est également important d’essuyer l’eau condensée du flacon froid et vide avant de transférer les mouches dans le flacon.
