检查胡萝卜体瘦素信号的实验方法及其对呼吸控制的影响

我们的协议可用于检查瘦素对外周切摩弹性呼吸控制中卡罗蒂德身体的呼吸作用，以及对缺氧的生理反应。我们还可以分别利用手术和化学脱膜和腺病毒转染，评估卡罗蒂德身体功能损失和增益的影响。在开始手术之前，测量定制全身表面腔室内的温度，并测量实验室的相对湿度。

接下来，测量实验鼠的体重和直肠温度。将鼠标放在室内，在动物剃光的颈部周围放置一个测光圈。并确保完全密封腔室，以避免空气泄漏。

等待大约 30 分钟，直到鼠标保持安静，腔室处于恒定音量。在开始记录呼吸信号和周围氧饱和度之前，在诺莫夏。20分钟的诺莫夏后，使动物暴露在10%氧气和3%二氧化碳的恒定混合气流中。

并开始记录呼吸信号和周围氧饱和度中急性缺氧的第一周期。在缺氧的前 30 秒，打开腔室底部的两个小侧端口，以便插入混合气体。最初 30 秒后，关闭腔室的一个小侧端口，并继续以恒定缺氧值记录 5 分钟受启发氧气分数的 10%。

在缺氧治疗结束时，切换流入源，将鼠标重新暴露在室内空气中，并允许动物在诺莫米夏恢复至少30分钟，然后再开始下一次分析。实验结束时，将注射器插入腔室底部的一个小侧端口，将一毫升室内空气注入整个血液多血造影室三次，以校准腔室。第三次冲洗后，测量腔室中的温度，动物仍在室内，腔室仍然关闭。

然后，打开腔室，测量小鼠的直肠温度，然后再将动物返回到其家庭笼子。为手术切除腹窦神经，给麻醉小鼠施用镇痛，并去除颈部腹部区域的头发。用贝塔丁和酒精消毒裸露的皮肤，并在动物的眼睛上涂抹软膏。

做中线切口后，取出结缔和脂肪组织，以暴露常见冠状动脉的分叉，并确定低牙神经。抬起低牙神经，将眼痛神经暴露在正下方，并使用微弹簧剪刀双边解剖骨窦神经。当卡罗蒂德体暴露后，在冰上四微升液体马特里格尔基质中轻轻悬浮一微升适当的腺病毒，并两侧将病毒悬浮液的五微升应用到卡罗蒂德体区域。

等待两到三分钟，直到液体Matrigel基质凝固，然后用6-0丝缝合关闭切口，并施用1毫升的正常盐水皮。然后将鼠标放在一个恢复室中，进行监测，直到胸腔卧体卧化，然后再将动物返回到其家庭笼子。连续输液瘦素显著增加瘦C57BL/6小鼠的缺氧通气反应，而卡罗蒂德鼻窦神经解剖可消除这种瘦素诱导的增加。

不出所料，瘦素输液后，假手术组不会观察到胡萝卜窦神经解剖对低氧通气反应的衰减作用。瘦素受体长异构体在瘦素受体长异构体中诱导长同形表达，导致低氧通气反应显著增加。而与控制乳腺病毒的转染后，没有变化被观察到。

这些技术允许分析卡罗蒂德体在外周切摩弹性中的作用和瘦素对卡罗蒂德身体在呼吸控制中的作用。