果蝇幼虫的欧诺细胞的解剖和脂滴染色

这种类细胞解剖和脂滴染色的方法，可用于在正常和有压力的条件下，实现果蝇幼虫类细胞中脂滴的出现。这种方法为研究脂质代谢提供了一个有用的工具，不仅在昆虫中，而且在哺乳动物中，只有几个小的修改。为了诱导产卵，将150只雌性处女苍蝇和75只所需基因型的雄性苍蝇放在产卵瓶中，将瓶子放在25摄氏度的孵化器下，湿度为60%。

一小时后，将苍蝇转移到新瓶子里，让苍蝇在新瓶子里产卵一小时，然后把大人移走。然后，让卵子在25摄氏度的25度下发育成第三个星幼虫，周期为12小时。在开始饥饿治疗之前，将一张大小适当的滤纸放入一个六厘米的培养皿中，并在纸张上加入一毫升 PBS 以创建饥饿室。

要制作一个控制处理室，请将五毫升布卢明顿标准玉米粉放入六厘米的培养皿中。当腔室准备就绪时，使用小油漆刷从产卵瓶中收集相同大小的星幼虫。和20幼虫随机进入每个饥饿和控制室。

然后将腔室放在孵化器中，进行12、24或36小时的发育和/或饥饿。在治疗期结束时，使用钳子将幼虫从每个腔室轻轻地转移到含有冰冷 PBS 的解剖板中，然后将该板置于立体显微镜下。将第一幼虫的腹侧向上定向，用钳子轻轻地将幼虫抱在位。

将一根针穿过咽部，将另一根针穿过吸孔，将幼虫固定在板上。使用Vannas弹簧剪刀通过表皮从动物的前部到后部的纵向切口。使用钳子去除表皮的内部组织，注意避免表皮内表面的肌细胞受损。

然后使用钳子取回解剖针，将表皮转移到冰上 PBS 的 1.5 毫升微离心管。对于脂液滴染色，在固定缓冲液中孵育解剖的表皮在旋转器的室温下30分钟，随后在PBS的一毫升快速再悬浮。然后每次洗涤一毫升 PBS 中用三个五分钟洗涤样品，以去除残留的固定剂。

最后一次洗涤后，在旋转器上用适当的嗜脂探针孵育表皮样品30分钟。在孵育过程中，将样品管包裹在铝箔中，以保护组织免受光线的损害，并在一毫升PBS中清洗样品三次，每次洗涤10分钟。要对表核细胞进行成像，请将每个表皮样品转移到清洁显微镜幻灯片上的六微升安装介质中，调整组织的方向，使含有表核细胞的内部表面接触幻灯片的底部。

轻轻地将盖玻片放在表皮上，用清晰的指甲油密封边缘。抛光剂干燥后，在共合显微镜上对样品进行成像，将 63 X 放大倍率与适当的激发和发射波长一起进行。在不同发育阶段的正常喂养幼虫的奥细胞内，有一些可检测的脂质液滴。

然而，正如在这些代表性图像中观察到的，脂质液滴在12、24和36小时的饥饿期中增加了类细胞的数量。该方法为相关研究领域的研究人员提供了一个简单可行的方案，以研究基因或环境操作是否导致细胞脂滴变化。