固体肿瘤细胞系侧面人口分析

侧群细胞分析是从肿瘤组织和肿瘤细胞系中分离和识别癌症干细胞的常用方法之一。此检测方便、快速且经济高效。这种方法有助于更好地了解基因或其他细胞外和细胞内信号对肿瘤细胞干细胞特性的影响。

许多因素会影响SP细胞在分析中的百分比，因此在正式实验之前探索适当的条件至关重要。在六井板中播种肿瘤细胞，并在37摄氏度的孵化器中孵化，提供5%的二氧化碳。当细胞密度达到约 90% 时，吸气培养介质，用三毫升 PBS 洗两次细胞。

然后，在每口井中加入500微升的0.25%的三氯辛-EDTA，在37摄氏度下孵化板一至三分钟。轻轻敲击板分离细胞，在每口井中加入三毫升PBS，并加2%FBS，将细胞上下吹动三到五次，以分散细胞团。检查显微镜下的细胞悬浮。

如果存在细胞团，则通过 70 微米过滤器通过悬架。将细胞转移到15毫升离心管，并在5分钟内以200倍g的离心机将其离心。取出超自然物，用三毫升PBS补充2%FBS，将细胞上下吹管三到五次混合。

使用血细胞计在显微镜下计数细胞，并在PBS中稀释它们，辅以2%FPS，最终浓度为每毫升6个细胞的1倍10倍。准备两个五毫升，聚苯乙烯，圆底试管，并添加一毫升的细胞悬架到每个管。将一根管子标记为试管，另一根将另一根管子标记为阻滞管。

通过稀释到适当的浓度来准备阻滞剂的解决方案。将其添加到阻滞管中并混合良好，然后在 37 摄氏度下孵育管 30 分钟。每10分钟摇动一次管子。

通过稀释到适当的浓度，准备霍赫斯特 33342 的解决方案。将其分别添加到试管和阻滞剂控制管中，混合良好，然后在 37 摄氏度下孵育管 60 分钟。每10分钟摇动一次管子。

孵化后，在200倍和4摄氏度下将细胞离心5分钟，然后小心地吸气超自然。用一毫升冰冷的PBS补充2%FBS，然后将细胞上下吹拌，以补充每个管中的细胞。在每个管子中加入一微升每毫升碘化物丙酸或PI，然后混合。

单击流细胞仪软件中的参数选项卡。首先，分别选择 FSC、SSC、霍奇斯特蓝、霍赫斯特红和 PI 的参数。其次，选择 PI 参数的对数比例。

最后，分别选择 FSC、SSC、霍奇斯特蓝、霍赫斯特红和 PI 参数的面积和宽度比例。先从试管中运行电池，然后使用相同的电压和门从阻滞剂控制管中运行电池。从每个样本中收集 20 到 10 万个事件，以分析 SP 细胞的百分比。

该方法用于检测MDA-MB-231人类乳腺癌细胞系中SP细胞的比例。FSC-A与PI-A的点图显示了死细胞、细胞碎片和PI负细胞的主要种群，并进行了进一步分析。单个细胞群从 FSC-A 与 FSC-W 的点图中封闭，使用 SSC-A 与 SSC-W 的点图来分析 SP 细胞的比例，在未经处理的细胞中，SP 细胞的比例约为 0.9%，在用 reserpine 处理的细胞中约为 0.09%。

在MDA-MB-435细胞上测试了霍奇斯特33342的不同染色浓度，确定每毫升两微克最适合SP分析。低浓度使得SP细胞与其他种群难以区分，而高浓度则导致SP细胞消失。对维拉帕米尔和树泽平进行了测试，以确定MDA-MB-435细胞的适当阻滞剂。

大约 0.4% 的细胞在 verapamil 治疗后排出染料，但经过再塞平治疗后，该比率下降到约 0.1%，这表明树泽平是该细胞系更合适的阻滞剂。该协议还用于确定使用STAT3活化剂结肠素治疗的A549人肺腺癌细胞中的SP细胞比例，以及用FRA1抑制剂SKLB816治疗的T47D人类乳腺癌细胞中的SP细胞比例。该检测为信号通路对癌症干细胞特征的调节作用提供了线索，并有助于发现新的机制，最终指导肿瘤的靶向治疗。