近红外光免疫疗法为小鼠模型的胸膜传播

该方法可用于评估NIR-PIT在临床相关肿瘤模型中对胸肿瘤的治疗效果。使用胸膜传播癌症模型的NIR-PIT程序易于理解和执行。要建立鼠标传播模型，请使用聚苯乙烯泡沫制作阻塞剂，并用 70% 乙醇进行消毒。

将针头连接到塞子上，尖端从塞子中伸出五毫米。用干净的钳子弯曲一个30米针的尖端，或用70%乙醇清洁的硬物，用PBS的100微升中10倍于6个目标肿瘤细胞填充注射器。确认麻醉后，19至21克，8至12周大，雌性，同源性，同源性裸体鼠标，对踏板反射缺乏反应。

将针头通过腹间空间插入胸部，上下移动针头以避免接触肋骨。当尖端穿过间歇空间时，将注射器放置，使其压在小鼠身上，并注入目标细胞的整个体积。注射后，将鼠标卷起两到三次，将细胞扩散到胸腔内，并将鼠标放回笼中进行监测，直到完全恢复。

细胞注射后24小时，此后每天给麻醉肿瘤细胞注射小鼠注射200微升，每毫升15毫克D-露西弗林。10 分钟后，将鼠标放入生物发光成像仪中，并在成像仪软件中打开采集控制面板。选择发光、照片和覆盖。

将曝光时间设置为自动、从宾宁到小、F/Stop 到一到一用于发光和八到照片，将视场设置为 C.Click 获取以成像生物发光。将显示格式设置为 Radians，并在工具调色板面板中从兴趣区域工具中选择圆圈。单击"感兴趣区域"以测量表面生物发光强度，并使用配置测量选择与实验相关的值。

将此数据表导出为 csv 文件。然后使用文件中的生物发光强度量化的总通量值。在对肿瘤注射小鼠进行近红外光疗之前，使用功率计测量690纳米波长激光的光剂量，并将输出调整为每平方厘米100毫瓦。

治疗前24小时，通过肿瘤注射动物的尾静脉，静脉注射50至200微升PBS的抗体光敏剂。在光疗治疗当天，将麻醉结合注射的肿瘤小鼠置于苏平位置，用铝箔保护非目标部位。当所有防护罩都放置完毕后，使用每平方厘米 100 焦耳的激光用近红外光照射胸腔约 30 秒。

当辐照完成，老鼠醒来后，将动物送回笼子，并测量每天的生物发光。在这项具有代表性的分析中，SDS-PAGE分析证实了抗多普兰素抗体与IR700的结合。肿瘤细胞注射后，应进行生物发光成像和扩散发光成像断层扫描，以确定哪些小鼠在胸腔中表现出足够的荧光酶活性，以便进一步研究。

注射后的第五天，抗多普兰素抗体IR700注射小鼠在胸肿瘤中表现出高IR700荧光和荧光酶活性，表明静脉注射的IR700结合抗体到达传播的胸膜肿瘤部位。值得注意的是，接受近红外光免疫疗法治疗的胸膜传播小鼠的荧光素活性降低，而对照组的相对光单元表现出强度的逐渐增加。由于所需的NIR辐照能量取决于细胞系和抗体，请务必在体外提前检查情况。