斑马鱼早期荧光微塑料的积累和分布

斑马鱼早期荧光微塑料的积累和分布。介绍。微塑料的生物积累在它们的毒性作用中起着关键作用。然而，作为颗粒物，它们的生物累积与许多其他污染物不同。

本文描述的是一种可行的方法，可以直观地确定使用荧光微塑料在斑马鱼胚胎或幼虫中的微塑料的积累和分布。这些实验是按照国家动物伦理审查指导实验室动物指南进行的。一是胚胎采集。

成年斑马鱼起源于中国斑马鱼资源中心。鱼被保存在20升玻璃罐中，在恒温下循环木炭过滤的自来水系统，即28摄氏度，在14和10小时的光圈中，光：暗。鱼每天用阿特米亚纳普利喂两次。

建议每天最多给予3%的鱼体重，每次应在五分钟内食用。发育良好的成年斑马鱼在繁殖前一天晚上以一雄二雌的比例被转移到产卵池中。第二天早上，鱼在光循环开始后开始产卵。

鸡蛋使用巴斯德移液器收集，用10%Hank溶液冲洗数次，然后用显微镜检查受精情况。受精卵经过大约两个小时的受精后经过期，可以清楚地识别出来。受精胚胎在含有200毫升10%汉克溶液的500毫升烧瓶中孵育，1%甲基蓝在28摄氏度下消毒。

每个 2 毫升溶液中的加载速率不超过一个胚胎。二、准备微塑料悬架。标称直径为500纳米的绿色荧光标签聚苯乙烯珠的库存溶液被声波化10分钟。

用 10% Hank 的溶液稀释库存溶液，以产生所需的暴露解决方案，即每升 0.1、1 和 10 毫克。微塑料的暴露溶液在暴露前总是新鲜准备的。三、微塑料暴露。

随机挑选了六个新受精胚胎，然后转移到每口井的六个井板中，其中含有五毫升不同浓度的微塑料溶液。包含包含 10% Hank 解决方案的对照组。三脚架井，共18个胚胎，用于每次治疗。

胚胎在与成人相同的光暗周期和温度下孵育，每12小时观察一次。死者立即被移走。微塑料解决方案每 24 小时更新 90%。

在暴露期间，鱼不喂食。一般来说，胚胎的孵化从受精后48小时开始，到受精后72小时左右完成。四、微塑料分布评估。

在24-48-72-96和120小时后受精，胚胎和幼虫，从三个复制品各一个，随机选择和冲洗与10%汉克的解决方案。胚胎和幼虫被安排并准备观察。在此之前，幼虫被转移到培养皿中，并暴露在0.016%的三角肌麻醉中。

用荧光显微镜观察鱼类，并使用成像软件进行成像。鱼的荧光强度通过图像J NIH进一步量化。代表性结果。

结果表明，微塑料可以以依赖浓度的方式在斑马鱼胚胎和幼虫中生物积累。孵化前，在胚胎周围发现强烈的荧光：在斑马鱼幼虫中，蛋黄囊、腹膜和胃肠道是微塑料的主要积累部位。讨论。这一结果将促进我们对微塑料对鱼类毒性的理解，此处描述的方法可能被推广，以确定斑马鱼早期生命阶段其他类型的荧光材料的积累和分布。

由于胆汁将作为对抗大尺寸粒子的有效屏障，因此可能需要在暴露前进行减压过程。然而，在考虑现实世界中暴露的状况时，更建议具有胆汁的胚胎评估污染物的生态毒性。微塑料在溶液中的行为对生物利用性也至关重要。

应在暴露期间跟踪微塑料的物理化学特性。