얼룩말 물고기의 초기 생활 단계에서 형광 미세 플라스틱의 축적 및 분포. 소개. 미세 플라스틱의 생체 축적은 독성 효과에 중요한 역할을합니다. 그러나, 미립자로, 그들의 생체 축적은 많은 그밖 오염 물질과 다릅니다.
여기에 설명된 형광 미세 플라스틱을 사용하여 제브라피시 배아 또는 애벌레에서 미세 플라스틱의 축적 및 분포를 시각적으로 결정하는 실행 가능한 방법이다. 실험은 동물 복지의 윤리적 검토를위한 국립 가이드 실험실 동물 지침에 따라 수행되었다. 하나, 배아 수집.
성인 얼룩말 물고기는 중국 제브라피시 자원 센터에서 유래. 물고기는 14 및 10 시간의 광기간에, 28 섭씨, 일정한 온도에서 숯 여과 수돗물 시스템을 재순환20 리터 유리 탱크에서 유지됩니다. 생선은 아르테미아 나우플리이와 함께 하루에 두 번 먹입니다.
음식은 하루에 최대 3 %의 생선 무게로 주어지며 매번 5 분 이내에 섭취해야하는 것이 좋습니다. 잘 발달 된 성인 얼룩말 물고기는 번식 전날 밤에 한 남성에서 두 명의 암컷의 비율로 산란 탱크로 옮겨갑니다. 다음 날 아침, 물고기는 빛 주기의 개시 후에 생성하기 시작합니다.
계란은 파스퇴르 파이펫을 사용하여 수집되고, 10%Hank의 용액으로 여러 번 헹구고, 현미경을 사용하여 수정을 확인합니다. 수정란은 약 2시간 후 수정 후 골짜기 기간을 거치며 명확하게 확인할 수 있다. 수정된 배아는 섭씨 28도에서 소독을 위한 1%메틸렌 블루로 10%의 행크용 용액200 밀리리터를 함유한 500밀리리터 비커로 배양됩니다.
적재율은 각 2밀리리터 용액에서 하나의 배아를 초과하지 않습니다. 2, 미세 플라스틱 현탁액의 준비. 명목 직경 500나노미터의 녹색 형광표 폴리스티렌 구슬의 스톡 솔루션은 10분 동안 초음파 처리됩니다.
스톡 솔루션을 10% Hank의 솔루션으로 희석하여 리터당 0.1, 1 및 10밀리그램과 원하는 노출 솔루션을 생성합니다. 미세 플라스틱의 노출 솔루션은 노출 전에 항상 신선하게 준비됩니다. 세 가지, 미세 플라스틱 노출.
새로 수정된 6개의 태아는 무작위로 선택된 다음, 다른 농도를 가진 5밀리리터의 미세 플라스틱 솔루션을 포함하는 6개의 우물 판의 각 우물로 옮겨집니다. 행크의 솔루션 10%를 포함하는 제어 그룹이 포함됩니다. 총 18개의 배아를 가진 삼중 우물은 각 치료에 사용됩니다.
배아는 성인과 같은 밝은 어두운 주기 및 온도의 밑에 배양되고, 매 12 시간마다 관찰됩니다. 죽은 사람은 즉시 제거됩니다. 마이크로 플라스틱 솔루션은 24시간마다 90%씩 갱신됩니다.
노출 기간 동안, 물고기는 먹이지 않습니다. 일반적으로, 배아의 부화는 48 시간 후 수정에서 시작하고 약 72 시간 후 수정에서 완료합니다. 네, 미세 플라스틱 분포의 평가.
24-48-72-96 및 120 시간 후 수정에서, 배아와 애벌레, 세 복제의 각각에서 하나, 무작위로 선택하 고 10%Hank의 용액으로 헹구는. 배아와 애벌레는 관찰을 위해 배치되고 준비됩니다. 사전에 애벌레는 페트리 접시로 옮겨지고 마취를 위해 0.016 %의 트리카인에 노출됩니다.
물고기는 형광 현미경으로 관찰되고, 화상 진찰 소프트웨어로 심상화됩니다. 물고기의 형광 강도는 ImageJ NIH로 더욱 정량화됩니다. 대표적인 결과.
미세먼지가 제브라피시 배아와 유충에서 농도 의존적 방식으로 바이오축적될 수 있다는 결과가 나타났다. 부화하기 전에, 강한 형광은 배아 초리온 주위에 발견됩니다; 얼룩말 물고기 애벌레에있는 동안, 노른자 낭, 심낭, 위장관은 미세 플라스틱의 주요 축적 사이트입니다. 토론. 이 결과는 물고기에 미세 플라스틱의 독성에 대한 우리의 이해를 발전시키고, 여기에 설명 된 방법은 잠재적으로 제브라피시의 초기 생활 단계에서 형광 물질의 다른 유형의 축적 및 분포를 결정하기 위해 일반화 될 수있다.
초리온은 큰 크기의 입자에 대한 효과적인 장벽역할을 하기 때문에, 노출되기 전에 의 반향 과정이 필요할 수 있다. 그러나, chorion을 온전히 가진 태아는 실제 세계에 있는 노출의 상태를 고려할 때 오염물질의 생태독성을 평가하기 위하여 더 좋습니다. 용액에서 미세 플라스틱의 동작은 생체 이용률에도 중요합니다.
미세 플라스틱의 물리 화학적 특성은 노출 기간 동안 추적되어야합니다.
