Accumulation et distribution de microplastiques fluorescents dans les premiers stades de vie du poisson zèbre. Introduction. La bioaccumulation des microplastiques joue un rôle clé dans leurs effets toxiques. Cependant, en tant que particules, leurs bioaccumulations sont différentes de celles de nombreux autres polluants.
Décrit ici est une méthode réalisable pour déterminer visuellement l’accumulation et la distribution des microplastiques dans les embryons de poissons zèbres ou les larves à l’aide de microplastiques fluorescents. Les expériences ont été menées conformément au guide national Sur les animaux de laboratoire pour l’examen éthique du bien-être des animaux. Premièrement, la collecte d’embryons.
Les poissons zèbres adultes proviennent du Centre de ressources sur le poisson zèbre de Chine. Les poissons sont maintenus dans des réservoirs en verre de 20 litres avec un système d’eau du robinet filtré au charbon de bois à une température constante, à savoir 28 degrés Celsius, sur une photopériode de 14 et 10 heures, clair: sombre. Les poissons sont nourris deux fois par jour avec Artemia nauplii.
Il est recommandé que la nourriture soit donnée à un maximum de 3% de poids de poisson par jour et doit être consommée dans les cinq minutes à chaque fois. Les poissons zèbres adultes bien développés sont transférés dans le réservoir de frai à un rapport d’un mâle à deux femelles la nuit précédant la reproduction. Le lendemain matin, les poissons commencent à frayer après le début du cycle de lumière.
Les œufs sont recueillis à l’aide d’une pipette Pasteur, rincés avec la solution de Hank à 10% plusieurs fois, puis vérifiés pour la fécondation à l’aide d’un microscope. Les œufs fécondés subissent la période de clivage après environ deux heures après la fécondation et peuvent être clairement identifiés. Les embryons fécondés sont incubés dans un bécher de 500 millilitres contenant 200 millilitres de solution de Hank à 10% avec 1% de bleu de méthylène pour la désinfection à 28 degrés Celsius.
Le taux de charge ne dépasse pas un embryon dans chaque solution de 2 millilitres. Deux, la préparation de suspensions en microplastique. La solution mère de billes vertes de polystyrène étiquetées par fluorescence d’un diamètre nominal de 500 nanomètres est soniquée pendant 10 minutes.
Diluer la solution mère avec 10% de la solution de Hank pour produire les solutions d’exposition souhaitées, à savoir 0,1, 1 et 10 milligrammes par litre. Les solutions d’exposition des microplastiques sont toujours fraîchement préparées avant l’exposition. Troisièmement, l’exposition aux microplastiques.
Six embryons nouvellement fécondés sont sélectionnés au hasard, puis transférés dans chaque puits de six plaques de puits contenant cinq millilitres de solutions de microplastiques à différentes concentrations. Les groupes témoins contenant 10% de la solution de Hank sont inclus. Des puits triples, avec un total de 18 embryons, sont utilisés pour chaque traitement.
Les embryons sont incubés sous le même cycle clair-obscurité et la même température que les adultes, et sont observés toutes les 12 heures. Les morts sont enlevés immédiatement. Les solutions microplastiques sont renouvelées à 90% toutes les 24 heures.
Pendant la période d’exposition, les poissons ne sont pas nourris. En général, l’éclosion de l’embryon commence à 48 heures après la fécondation et se termine vers 72 heures après la fécondation. Quatrièmement, l’évaluation de la distribution des microplastiques.
À 24-48-72-96 et 120 heures après la fécondation, les embryons et les larves, un de chacune des trois répétitions, sont sélectionnés au hasard et rincés avec la solution de Hank à 10%. Les embryons et les larves sont disposés et préparés pour l’observation. Au préalable, les larves sont transférées dans une boîte de Petri et exposées à 0,016% de tricaine pour l’anesthésie.
Les poissons sont observés au microscope à fluorescence et entiras avec un logiciel d’imagerie. L’intensité de fluorescence chez les poissons est quantifiée avec ImageJ NIH. Résultats représentatifs.
Les résultats montrent que les microplastiques peuvent se bioaccumuler dans les embryons et les larves de poissons zèbres d’une manière dépendante de la concentration. Avant l’éclosion, une forte fluorescence se trouve autour du chorion embryonnaire; tandis que chez les larves de poissons zèbres, le sac vitellin, le péricarde et le tractus gastro-intestinal sont les principaux sites accumulés de microplastiques. discussion. Ce résultat fera progresser notre compréhension de la toxicité des microplastiques pour les poissons, et la méthode décrite ici peut potentiellement être généralisée pour déterminer l’accumulation et la distribution d’autres types de matériaux fluorescents dans les premiers stades de vie du poisson zèbre.
Étant donné que le chorion agira comme une barrière efficace contre les particules de grande taille, le processus de déchorionation avant l’exposition peut être nécessaire. Cependant, l’embryon avec le chorion intact est plus recommandé pour évaluer l’écotoxicité des polluants lorsque l’on considère l’état d’exposition dans le monde réel. Le comportement des microplastiques dans la solution est également essentiel à la biodisponibilité.
Les caractéristiques physicochimiques des microplastiques devraient faire l’objet d’un suivi pendant toute la durée d’exposition.
