Zebra balıklarının erken yaşam aşamalarında floresan mikroplastiklerin birikmesi ve dağılımı. Giriş. Mikroplastiklerin biyoakümülasyonu toksik etkilerinde önemli bir rol oynar. Bununla birlikte, partikül olarak, biyoakümülasyonları diğer birçok kirleticiden farklıdır.
Burada açıklanan, floresan mikroplastikler kullanarak zebra balığı embriyolarında veya larvalarında mikroplastiklerin birikmesini ve dağılımını görsel olarak belirlemek için uygulanabilir bir yöntemdir. Deneyler, hayvan refahının etik olarak gözden geçirilmesi için ulusal rehber Laboratuvar hayvan Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirildi. Bir, embriyo toplama.
Yetişkin zebra balıkları Çin Zebra Balığı Kaynak Merkezi'nden kaynaklanmaktadır. Balıklar, 14 ve 10 saatlik bir fotoperiyod üzerinde sabit bir sıcaklıkta, yani 28 santigrat derece, ışık:karanlık, devridaim kömür filtreli musluk suyu sistemine sahip 20 litrelik cam tanklarda tutulur. Balıklar Artemia nauplii ile günde iki kez beslenir.
Yiyeceklerin günde maksimum% 3 balık ağırlığında verilmesi ve her seferinde beş dakika içinde yenmesi önerilir. İyi gelişmiş yetişkin zebra balıkları, üremeden bir gece önce bir erkek ila iki dişi oranında yumurtlama tankına aktarılır. Ertesi sabah, balık ışık döngüsünün başlangıcından sonra yumurtlamaya başlar.
Yumurtalar pasteur pipet kullanılarak toplanır, birkaç kez% 10 Hank çözeltisi ile durulanır ve daha sonra mikroskop kullanılarak döllenme haline gelir. Döllenmiş yumurtalar, döllenmeden yaklaşık iki saat sonra bölünme süresinden geçer ve açıkça tanımlanabilir. Döllenmiş embriyolar, 28 santigrat derecede dezenfeksiyon için% 10 Hank çözeltisinin% 1'i metilen mavisi ile 200 mililitrelik bir beherde inkübe edilir.
Yükleme oranı her 2 mililitrelik çözeltide bir embriyoyu geçmiyor. İki, mikroplastik süspansiyonların hazırlanması. Nominal çapı 500 nanometre olan yeşil floresan etiketli polistiren boncukların stok çözeltisi 10 dakika boyunca sonicated edilir.
Litre başına 0,1, 1 ve 10 miligram olmak üzere istenen maruz kalma çözümlerini üretmek için stok çözeltisini %10 Hank'in çözeltisiyle seyreltin. Mikroplastiklerin maruz kalma çözeltileri maruz kalmadan önce her zaman taze olarak hazırlanır. Üç, mikroplastik maruziyet.
Altı yeni döllenmiş embriyo rastgele seçilir ve daha sonra farklı konsantrasyonlarda beş mililitre mikroplastik çözelti içeren altı kuyu plakasının her kuyusuna aktarılır. %10 Hank'in çözümünü içeren kontrol grupları dahildir. Her tedavi için toplam 18 embriyoya sahip triplikat kuyuları kullanılır.
Embriyolar yetişkinlerle aynı açık-karanlık döngü ve sıcaklık altında inkübe edilir ve her 12 saatte bir gözlenir. Ölüler hemen çıkarılır. Mikroplastik çözeltiler her 24 saatte bir %90 yenilenir.
Maruz kalma süresi boyunca balıklar beslenmez. Genellikle, embriyonun kuluçkalanması döllenme sonrası 48 saatte başlar ve döllenme sonrası yaklaşık 72 saatte tamamlanır. Dört, mikroplastik dağılımının değerlendirilmesi.
Döllenme sonrası 24-48-72-96 ve 120 saatlik bir zamanda, üç kopyanın her birinden biri olan embriyolar ve larvalar rastgele seçilir ve% 10 Hank'in çözeltisi ile durulanır. Embriyolar ve larvalar düzenlenir ve gözleme hazırlanır. Önceden, larvalar bir Petri kabına aktarılır ve anestezi için% 0.016 trikaine maruz kalır.
Balıklar floresan mikroskop ile gözlemlenir ve görüntüleme yazılımı ile görüntülenir. Balıklardaki floresan yoğunluğu ImageJ NIH ile daha da ölçülür. Temsili sonuçlar.
Sonuçlarda mikroplastiklerin zebra balığı embriyolarında ve larvalarında konsantrasyona bağlı bir şekilde biyoakümülate edebildiği gösterilmiştir. Kuluçkadan önce, embriyonik koronun etrafında güçlü floresan bulunur;zebra balık larvalarında ise yumurta sarısı kesesi, perikard ve gastrointestinal sistem mikroplastiklerin ana birikmiş bölgeleridir. tartışma. Bu sonuç, mikroplastiklerin balıklara toksisitesi hakkındaki anlayışımızı ilerletecektir ve burada açıklanan yöntem, zebra balıklarının erken yaşam aşamalarında diğer floresan madde türlerinin birikmesini ve dağılımını belirlemek için potansiyel olarak genellenebilir.
Koroyon, büyük boyutlu parçacıklara karşı etkili bir bariyer görevi görebileceğinden, maruz kalmadan önce azil işlemi gerekebilir. Bununla birlikte, korozyon bozulmamış embriyo, gerçek dünyadaki maruz kalma durumu göz önüne alındığında kirleticilerin ekotoksikliğini değerlendirmek için daha fazla tavsiye edilir. Mikroplastiklerin çözeltideki davranışı biyoyararlanm için de kritik öneme sahiptir.
Mikroplastiklerin fizikokimyasal özellikleri maruz kalma süresi boyunca takip edilmelidir.
