通过超声引导注射产生胰腺癌细胞的原位异种移植物

该协议描述了一种使用结合细胞注射和评估植入和肿瘤发展的系统生成胰腺癌原位小鼠模型的方法。该技术具有很大的可重复性，微创性，可以克服外科手术引起的许多缺点，并符合3R原则。超声引导下注射可用于其他原位模型，例如胆道树或乳腺癌模型中的注射。

这种技术的使用可以与小分子的使用相结合。使用带有27号针头的结核菌素注射器，开始准备8周龄的20无胸腺裸体-Foxn-1nu雌性小鼠用于超声引导注射。接下来，打开成像仪并选择鼠标，小，腹部"在换能器面板的应用程序菜单上。

确保出现B模式或亮度模式成像窗口，并且系统已准备好获取B模式数据。转到研究浏览器以选择"新建研究"并键入研究名称和信息，例如研究日期。然后，在系列名称中填写所有必要的信息，例如动物品系、ID、出生日期。

输入信息后，点击完成"为B模式成像准备程序。将麻醉的小鼠放在其右翼，放在加热到37摄氏度的处理台上，鼻子放在鼻锥中，并在小鼠的眼睛上涂抹一滴兽医软膏。然后，使用粘性纱布将鼠标的右手、右脚和尾巴粘在动物平台上的电极垫上。

通过电极垫记录小鼠的呼吸频率和心电图。在向小鼠注射PANC1细胞之前，用70%乙醇消毒小鼠皮肤，并使用粘性纱布保持左胁皮肤伸展。使用没有针头的20毫升注射器在小鼠的腹部和左胁上涂抹超声凝胶。

借助超声换能器的高度控制旋钮，降低换能器以接触鼠标的左翼，并将换能器横向放置在动物的身体上。然后，移动换能器以使用B模式成像在换能器显示屏上可视化胰腺。准备一个50微升汉密尔顿注射器，含有1000万个PANC1细胞，悬浮在20微升PBS中，用经过消毒的30毫米28号针头，并将注射器放在适当的支架上。

使用支架显微操纵器，将注射器降低到小鼠皮肤上，针头斜面朝上并与超声换能器在同一平面上，与换能器形成45度角。用显微操纵器穿孔皮肤并将注射器针头插入胰腺，同时观察显示的超声图像以遵循轨迹。一旦针头插入胰腺，通过在注射器的柱塞上施加恒定的压力来注射含有细胞的20微升推注。

正确的注射程序可以通过胰腺中存在小气泡和低回声液体的流动来检查。注射5至10秒后，缩回针头。然后，取下超声换能器并从侧面清洁凝胶。

完成后，将小鼠单独放在一个新的笼子中观察，直到它恢复足够的意识以维持胸骨卧位。代表性图像显示了超声引导细胞注射后胰尾部存在肿瘤肿块，证实了该方案的可重复性。从细胞注射后第8天开始，每周一次通过超声成像评估源自PANC1细胞的原位胰腺肿瘤的肿瘤体积。

在第43天的实验结束时，获得了肿瘤肿块的超声图像。在尸检检查中，观察到肿瘤肿块，一小部分健康胰腺，脾脏，胃和肝脏。此外，将肿瘤肿块移出用于组织学分析。

将鼠标放在桌子的右侧很重要，并且必须适当拉伸皮肤以避免细胞溢出胰腺的风险。通过超声引导注射获得的胰腺癌模型的未来应用包括旨在开发适当的治疗方法或治疗组合的研究。