يصف البروتوكول طريقة لإنشاء نموذج فأر تقويمي لسرطان البنكرياس باستخدام نظام يجمع بين حقن الخلايا وتقييم engraftment وتطور الأورام. هذه التقنية لديها استنساخ كبير ، وهي طفيفة التوغل ، وتسمح بالتغلب على العديد من العيوب الناجمة عن العملية الجراحية ، وتتوافق مع مبادئ 3Rs. يمكن استخدام الحقن الموجه بالصدى لنماذج تقويم العظام الأخرى ، مثل الحقن في الشجرة الصفراوية أو نماذج سرطان الثدي.
يمكن أن يقترن استخدام مثل هذه التقنية باستخدام جزيئات صغيرة. ابدأ في تحضير أنثى الفئران البالغة من العمر 8 أسابيع 20 Athymic Nude-Foxn-1nu للحقن الموجه بالموجات فوق الصوتية عن طريق إعطاء الترامادول داخل الصفاق بجرعة 5 ملليغرام لكل كيلوغرام باستخدام حقنة السل بإبرة قياس 27. بعد ذلك ، قم بتشغيل جهاز التصوير وحدد الماوس ، صغير ، بطن"في قائمة التطبيق من لوحة محول الطاقة.
تأكد من ظهور نافذة التصوير B-Mode أو Brightness Mode وأن النظام جاهز للحصول على بيانات B-Mode. انتقل إلى متصفح الدراسة لتحديد دراسة جديدة "واكتب اسم الدراسة ومعلوماتها ، مثل تاريخ الدراسة. بعد ذلك ، املأ جميع المعلومات الضرورية في اسم السلسلة ، مثل سلالة الحيوان والمعرف وتاريخ الميلاد.
بعد إدخال المعلومات ، انقر فوق "تم" لإعداد البرنامج لتصوير B-Mode. ضع الفأر المخدر على جانبه الأيمن على طاولة المناولة ساخنة عند 37 درجة مئوية مع خطمها في مخروط الأنف وضع قطرة من مرهم الطبيب البيطري على عيون الفأر. بعد ذلك ، استخدم شاشا لاصقا للصق اليد اليمنى والقدم اليمنى وذيل الماوس على وسادات القطب على منصة الحيوان.
يتم تسجيل معدل تنفس الماوس ومخطط كهربية القلب من خلال وسادات القطب. قبل حقن الفأر بخلايا PANC1 ، قم بتعقيم جلد الفأر بنسبة 70٪ من الإيثانول وحافظ على جلد الجناح الأيسر ممتدا باستخدام شاش لاصق. استخدم حقنة سعة 20 ملليلتر بدون إبرة لتطبيق جل الموجات فوق الصوتية على البطن والجناح الأيسر للماوس.
بمساعدة مقبض التحكم في الارتفاع لمحول الموجات فوق الصوتية ، قم بخفض محول الطاقة للمس الجانب الأيسر من الماوس ووضع محول الطاقة بشكل عرضي على جسم الحيوان. بعد ذلك ، حرك الترجام لتصور البنكرياس على شاشة محول الطاقة باستخدام التصوير B-Mode. قم بإعداد حقنة هاملتون سعة 50 ميكرولتر ، تحتوي على 10 ملايين خلية PANC1 معلقة في 20 ميكرولتر من PBS بإبرة معقمة عيار 30 ملم قياس 28 ووضع المحقنة على الحامل المناسب.
باستخدام حامل micromanipulator ، قم بخفض المحقنة إلى جلد الماوس ، مع وجه شطبة الإبرة لأعلى وفي نفس المستوى مثل محول الموجات فوق الصوتية ، وتشكيل زاوية 45 درجة مع محول الطاقة. قم بثقب الجلد باستخدام المعالج الدقيق وأدخل إبرة المحقنة في البنكرياس أثناء مراقبة صورة الموجات فوق الصوتية المعروضة لمتابعة المسار. بمجرد إدخال الإبرة في البنكرياس ، احقن بلعة 20 ميكرولتر تحتوي على الخلايا عن طريق الضغط المستمر على مكبس المحقنة.
يمكن التحقق من إجراء الحقن الصحيح من خلال وجود فقاعة صغيرة في البنكرياس وتدفق السائل الناقص المنشأ. بعد 5 إلى 10 ثوان من الحقن ، اسحب الإبرة. ثم قم بإزالة محول الموجات فوق الصوتية وتنظيف الجل من الجناح.
عند الانتهاء ، ضع الفأر بمفرده في قفص جديد تحت الملاحظة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على راقد القص. تظهر الصورة التمثيلية وجود كتلة ورم في ذيل البنكرياس بعد حقن الخلايا الموجهة بالصدى ، مما يؤكد استنساخ البروتوكول. تم تقييم حجم الورم لأورام البنكرياس التقويمية المشتقة من خلايا PANC1 عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية مرة واحدة في الأسبوع ، بدءا من اليوم 8 بعد حقن الخلايا.
في نهاية التجربة في اليوم 43 ، تم الحصول على صور الموجات فوق الصوتية لكتل الورم. في فحص التشريح ، لوحظت كتلة الورم ، وجزء صغير من البنكرياس الصحي والطحال والمعدة والكبد. بالإضافة إلى ذلك ، تم زرع كتل الورم للتحليل النسيجي.
من المهم وضع الماوس على جانبه الأيمن على الطاولة ، ويجب شد الجلد بشكل صحيح لتجنب خطر انسكاب الخلايا من البنكرياس. تشمل التطبيقات المستقبلية لنموذج سرطان البنكرياس الذي تم الحصول عليه عن طريق الحقن الموجه بالموجات فوق الصوتية الدراسات التي تهدف إلى تطوير العلاجات العلاجية المناسبة أو مجموعات العلاج.
