הפרוטוקול מתאר שיטה ליצירת מודל עכברי אורתוטופי של סרטן הלבלב באמצעות מערכת המשלבת הזרקת תאים והערכת חריטה ופיתוח גידולים. טכניקה זו יש שכפול גדול, הוא פולשני מינימלי, מאפשר להתגבר על חסרונות רבים הנגרמים על ידי הליך כירורגי, ועומד בעקרונות 3Rs. ההזרקה מונחית ההד יכולה לשמש למודלים אורתוטופיים אחרים, כגון הזרקות בעץ המרה או מודלים של סרטן השד.
השימוש בטכניקה כזו יכול להיות משולב עם השימוש במולקולות קטנות. התחל להכין 20 עכברים עירומים-Foxn-1nu אתימיים בני 8 שבועות להזרקה מונחית אולטרסאונד על ידי מתן טרמדול תוך צפק במינון של 5 מיליגרם לקילוגרם באמצעות מזרק שחפת עם מחט 27 מד. לאחר מכן, הפעל את התמונה ובחר עכבר, קטן, בטן"בתפריט היישום מלוח המתמרים.
ודא שחלון ההדמיה במצב B, או מצב בהירות, מופיע ושהמערכת מוכנה לקבל נתוני B-Mode. עבור אל דפדפן המחקר כדי לבחור מחקר חדש" והקלד את שם המחקר והמידע, כגון תאריך המחקר. לאחר מכן, מלא את כל המידע הדרוש בשם הסדרה, כמו זן בעלי חיים, מזהה, תאריך לידה.
לאחר הזנת המידע, הקש על סיום"כדי להכין את התוכנית להדמיה במצב B. הניחו את העכבר המרדים על צדו הימני על שולחן הטיפול המחומם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם חוטמו בתוך חרוט אף ומרחו טיפת משחה וטרינרית על עיני העכבר. לאחר מכן, השתמש בגאזה דביקה כדי להדביק את יד ימין, רגל ימין וזנב העכבר על רפידות האלקטרודה על פלטפורמת החיה.
קצב הנשימה והאלקטרוקרדיוגרמה של העכבר נרשמים דרך רפידות האלקטרודות. לפני הזרקת העכבר עם תאי PANC1, לטהר את עור העכבר עם 70% אתנול ולשמור על העור של האגף השמאלי מתוח באמצעות גזה דבק. השתמש מזרק 20 מיליליטר ללא המחט כדי להחיל ג'ל אולטרסאונד על הבטן ואת האגף השמאלי של העכבר.
בעזרת ידית בקרת הגובה של מתמר האולטרסאונד, הורידו את המתמר כדי לגעת באגף השמאלי של העכבר והניחו את המתמר באופן רוחבי לגוף החיה. לאחר מכן, הזז את המתמר כדי לדמיין את הלבלב בתצוגת המתמר באמצעות הדמיה במצב B. הכינו מזרק המילטון 50 מיקרוליטר, המכיל 10 מיליון תאי PANC1 המרחפים ב-20 מיקרוליטרים של PBS עם מחט מחוטא בקוטר 30 מ"מ והניחו את המזרק על המחזיק המתאים.
באמצעות מיקרומניפולטור המחזיק, מורידים את המזרק לעור העכבר, כאשר המחט משופעת כלפי מעלה ובאותו מישור כמו מתמר האולטרסאונד, ויוצרים זווית של 45 מעלות עם המתמר. לנקב את העור עם micromanipulator ולהחדיר את מחט מזרק לתוך הלבלב תוך התבוננות בתמונת אולטרסאונד על התצוגה כדי לעקוב אחר המסלול. לאחר החדרת המחט ללבלב, הזריקו בולוס של 20 מיקרוליטר המכיל את התאים על ידי הפעלת לחץ מתמיד על הבוכנה של המזרק.
הליך ההזרקה הנכון ניתן לבדוק על ידי נוכחות של בועה קטנה בלבלב ואת זרימת נוזל hypoechogenic. לאחר 5 עד 10 שניות של ההזרקה, להחזיר את המחט. לאחר מכן, הסר את מתמר האולטרסאונד ונקה את הג'ל מהאגף.
בסיום, הניחו את העכבר לבדו בכלוב חדש תחת השגחה עד שהוא יחזור להכרה מספקת כדי לשמור על משענת עצם החזה. התמונה המייצגת מראה את נוכחותה של מסת גידול בזנב הלבלב לאחר הזרקת תאים מונחית הד, המאשרת את יכולת השכפול של הפרוטוקול. נפח הגידול של גידולי לבלב אורתוטופיים שמקורם בתאי PANC1 הוערך על ידי הדמיית אולטרסאונד פעם בשבוע, החל מיום 8 לאחר הזרקת התא.
בנקודת הסיום של הניסוי ביום 43, נרכשו תמונות אולטרסאונד של המוני הגידול. בבדיקת נמק, מסת הגידול, נצפתה מנה קטנה של לבלב, טחול, קיבה וכבד בריאים. בנוסף, מסות הגידול הוצאו לניתוח היסטולוגי.
חשוב למקם את העכבר על צדו הימני על השולחן, ואת העור חייב להיות מתוח כראוי כדי למנוע את הסיכון של תאים נשפך מן הלבלב. יישומים עתידיים של מודל סרטן הלבלב המתקבל על ידי הזרקה מונחית אולטרסאונד כוללים את המחקרים שמטרתם פיתוח טיפולים מתאימים או שילובי טיפול.
