このプロトコルは、細胞の注入と腫瘍の生着および発生の評価を組み合わせたシステムを使用して、膵臓癌の同所性マウスモデルを生成する方法を記載しています。この技術は、優れた再現性を有し、低侵襲であり、外科的処置によって引き起こされる多くの欠点を克服することを可能にし、そして3Rの原則に準拠している。エコーガイド下注射は、胆道樹や乳がんモデルへの注射など、他の同所性モデルに使用できます。
そのような技術の使用は、小分子の使用と結びつくことができる。27ゲージの針を備えたツベルクリン注射器を使用して、1キログラムあたり5ミリグラムの用量でトラマドールを腹腔内投与することにより、超音波ガイド下注射のための8週齢20の無胸腺ヌード-Foxn-1nu雌マウスの準備を開始します。.次に、イメージャーの電源を入れ、トランスデューサーパネルのアプリケーションメニューでマウス、小、腹部「。
Bモードまたは輝度モードのイメージングウィンドウが表示され、システムがBモードデータを取得する準備ができていることを確認します。試験ブラウザに移動して新しい試験を選択し、試験名と情報(試験の日付など)を入力します。次に、動物系統、ID、生年月日など、必要なすべての情報をシリーズ名に入力します。
情報を入力したら、[完了]をタップして、Bモードイメージング用にプログラムを準備します。麻酔をかけたマウスを、鼻を鼻コーンに入れて摂氏37度に加熱したハンドリングテーブルに右脇腹に置き、マウスの目に獣医軟膏を一滴塗ります。次に、粘着ガーゼを使用して、マウスの右手、右足、尾を動物プラットフォームの電極パッドにテープで留めます。
マウスの呼吸数と心電図は、電極パッドを通して記録されます。マウスにPANC1細胞を注射する前に、マウスの皮膚を70%エタノールで消毒し、粘着ガーゼを使用して左脇腹の皮膚を伸ばしたままにします。針のない20ミリリットルの注射器を使用して、マウスの腹部と左脇腹に超音波ゲルを塗布します。
超音波トランスデューサーの高さ制御ノブの助けを借りて、トランスデューサーを下げてマウスの左脇腹に触れ、トランスデューサーを動物の体に横方向に置きます。次に、トランスデューサを動かして、Bモードイメージングを使用してトランスデューサーディスプレイ上の膵臓を視覚化します。消毒した30ミリメートルの28ゲージ針で20マイクロリットルのPBSに懸濁された1,000万個のPANC1細胞を含む50マイクロリットルのハミルトンシリンジを準備し、シリンジを適切なホルダーに置きます。
ホルダーマイクロマニピュレーターを使用して、針のベベルを上にして超音波トランスデューサーと同じ平面にシリンジをマウスの皮膚に下げ、トランスデューサーと45度の角度を形成します。マイクロマニピュレーターで皮膚に穿孔し、シリンジ針を膵臓に挿入しながら、表示された超音波画像を観察して軌跡をたどります。針が膵臓に挿入されたら、注射器のプランジャーに一定の圧力を加えて、細胞を含む20マイクロリットルのボーラスを注入します。
正しい注射手順は、膵臓内の小さな泡の存在と低エコー性流体の流れによって確認できます。注射の5〜10秒後、針を引っ込めます。次に、超音波トランスデューサーを取り外し、側面からゲルをきれいにします。
完了したら、胸骨横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、マウスを観察下の新しいケージに一人で置きます。代表的な画像は、エコーガイド下細胞注入後の膵臓尾部における腫瘍塊の存在を示しており、プロトコルの再現性を確認しています。PANC1細胞由来の同所性膵臓腫瘍の腫瘍体積を、細胞注入後8日目から週1回超音波画像法により評価した。
43日目の実験の終点で、腫瘍塊の超音波画像が取得された。剖検検査では、腫瘍塊、健康な膵臓、脾臓、胃、肝臓のごく一部が観察されました。さらに、腫瘍塊は組織学的分析のために外植されました。
マウスをテーブルの右側に配置することが重要であり、細胞が膵臓からこぼれるリスクを回避するために、皮膚を適切に伸ばす必要があります。超音波ガイド下注射によって得られる膵臓癌モデルの将来の用途には、適切な治療法または治療の組み合わせの開発を目的とした研究が含まれます。
