상기 프로토콜은 세포의 주입과 종양의 생착 및 발달의 평가를 결합하는 시스템을 사용하여 췌장암의 동교성 마우스 모델을 생성하는 방법을 기술한다. 이 기술은 재현성이 뛰어나고 최소 침습적이며 수술 절차로 인한 많은 단점을 극복 할 수 있으며 3R 원칙을 준수합니다. 에코 유도 주사는 담도 나무 주사 또는 유방암 모델과 같은 다른 동종 모델에 사용할 수 있습니다.
이러한 기술의 사용은 소분자의 사용과 결합 될 수 있습니다. 27 게이지 바늘이있는 투베르쿨린 주사기를 사용하여 트라마돌을 킬로그램 당 5 밀리그램의 용량으로 복강 내 투여하여 초음파 유도 주사를 위해 8 주 된 20 마리의 Athymic Nude-Foxn-1nu 암컷 마우스를 준비하십시오. 그런 다음 이미저를 켜고 변환기 패널의 응용 프로그램 메뉴에서 마우스, 소형, 복부"를 선택합니다.
B-모드 또는 밝기 모드 이미징 창이 나타나고 시스템이 B-모드 데이터를 수집할 준비가 되었는지 확인합니다. 스터디 브라우저로 이동하여 새 스터디"를 선택하고 스터디 이름과 스터디 날짜와 같은 정보를 입력합니다. 그런 다음 시리즈 이름에 동물 균주, ID, 생년월일과 같은 필요한 모든 정보를 입력하십시오.
정보를 입력한 후 완료"를 눌러 B-모드 이미징을 위한 프로그램을 준비합니다. 마취된 마우스를 오른쪽 옆구리에 놓고 코콘에 주둥이를 대고 섭씨 37도로 가열된 취급 테이블에 놓고 쥐의 눈에 수의사 연고 한 방울을 바릅니다. 그런 다음 접착 거즈를 사용하여 마우스의 오른손, 오른발 및 꼬리를 동물 플랫폼의 전극 패드에 테이프로 붙입니다.
마우스의 호흡수와 심전도는 전극 패드를 통해 기록됩니다. 마우스에 PANC1 세포를 주사하기 전에 70 % 에탄올로 마우스 피부를 살균하고 접착 거즈를 사용하여 왼쪽 옆구리의 피부를 늘린 상태로 유지하십시오. 바늘이없는 20 밀리리터 주사기를 사용하여 마우스의 복부와 왼쪽 측면에 초음파 젤을 바르십시오.
초음파 변환기의 높이 조절 손잡이를 사용하여 변환기를 내려 마우스의 왼쪽 측면을 만지고 변환기를 동물의 몸에 가로로 놓습니다. 그런 다음 변환기를 움직여 B-모드 이미징을 사용하여 변환기 디스플레이에 췌장을 시각화합니다. 살균 된 30mm 28 게이지 바늘로 20 마이크로 리터의 PBS에 현탁 된 1,000 만 개의 PANC1 세포가 들어있는 50 마이크로 리터 해밀턴 주사기를 준비하고 주사기를 적절한 홀더에 놓습니다.
홀더 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 바늘 베벨이 위를 향하고 초음파 변환기와 동일한 평면에 있도록 주사기를 마우스 피부로 내리고 변환기와 45도 각도를 형성합니다. 마이크로 매니퓰레이터로 피부를 천공하고 주사기 바늘을 췌장에 삽입하면서 궤적을 따라 디스플레이에 표시되는 초음파 이미지를 관찰합니다. 바늘이 췌장에 삽입되면 주사기의 플런저에 일정한 압력을 가하여 세포가 들어있는 20 마이크로 리터 볼 루스를 주입합니다.
올바른 주사 절차는 췌장에 작은 거품이 있고 저 에코 생성 유체의 흐름으로 확인할 수 있습니다. 주사 5-10 초 후 바늘을 수축시킵니다. 그런 다음 초음파 변환기를 제거하고 측면에서 젤을 청소하십시오.
완료되면 흉골 누운 자세를 유지하기에 충분한 의식을 회복 할 때까지 관찰중인 새 케이지에 마우스를 혼자 두십시오. 대표 이미지는 에코 유도 세포 주입 후 췌장 꼬리에 종양 덩어리가 존재하여 프로토콜의 재현성을 확인합니다. PANC1 세포로부터 유래된 동종 췌장 종양의 종양 부피는 세포 주입 후 8일째부터 시작하여 일주일에 한 번 초음파 영상으로 평가하였다.
43일째 실험의 종말점에서, 종양 덩어리의 초음파 이미지를 획득하였다. 부검 검사에서 종양 덩어리, 건강한 췌장, 비장, 위 및 간의 작은 부분이 관찰되었습니다. 추가적으로, 종양 덩어리를 조직학적 분석을 위해 이식하였다.
마우스를 테이블 위의 오른쪽에 놓는 것이 중요하며 세포가 췌장에서 쏟아질 위험을 피하기 위해 피부를 적절하게 늘려야합니다. 초음파 유도 주사에 의해 얻어진 췌장암 모델의 향후 응용에는 적절한 치료 치료 또는 치료 조합의 개발을 목표로하는 연구가 포함됩니다.
