离体 小鼠通过门静脉进行肝灌注

该视频演示了一种简化的程序，用于进行具有足够严谨性和可重复性的代谢肝脏研究，可以作为进行肝切除术以进行体内灌注研究的指南。该技术最好应用于实时代谢以检测功能，在疾病模型中的周转代谢物中。灌注可以精确控制肝脏可用的营养物质和激素。

虽然该技术不针对治疗，但肝脏灌注有助于了解疾病（如糖尿病、NAFLD 和 NASH）对肝脏代谢的病因和影响。随着新药的开发，评估肝脏中枢能量代谢的方法变得至关重要。这种方法可用于几种疾病的模型，包括癌症和疾病进展的几个不同阶段。

首先，在麻醉诱导后将小鼠的鼻子放入鼻锥中，然后贴下爪子。利多卡因通过皮下注射在髂前嵴区域进行双侧注射。进行脚趾捏合测试以确认不存在所有疼痛反射。

进行腹腔切开术，通过做一个三厘米宽的切口来暴露内脏器官。使用止血剂扩大切口，止血剂通过夹紧 xiphoid 过程来拉动牵引力。使用棉尖涂药器清除覆盖门静脉的小肠和大肠。

将丝状缝线放置在门静脉弓下，靠近肝脏。使用2-0缝线将第二丝缝线放在离肝脏远端的肠系膜下静脉的近端或远端。缝合线就位后，用22号导管对门静脉进行插管，使斜面保持朝上。

以不超过 15 度角进入门静脉。将第一根缝线绑过导管穿刺器。门静脉插管后，用丝缝线将导管从门静脉分支远端两到三毫米固定。

用第二根缝线固定导管的下部。用缝合线打结，将导管固定在门静脉的远端部分和周围组织。固定导管后，将一个1毫升注射器与38.1毫米长度的27号针头插入导管中以冲洗血液和气泡。

使用一毫米内径和五毫米外径硅胶管，带有固定的止动旋塞，将灌注柱连接到导管上，允许缓冲液流入肝脏，标志着灌注的开始。启动计时器后，使用剪刀切入下腔静脉以缓解增加的血管压力。通过观察肝脏颜色从粉红色或红色到淡黄色的均匀变化，确认灌注物通过肝脏的流动。

一旦确认血流，切除胃、小肠、大肠和周围组织的右肾。在手术助理的帮助下，当外科医生穿过顶叶腹膜和胸组织切除肝脏时，在腹腔和胸腔周围移动肝脏。向上抬起肝脏，用剪刀切开剩余的结缔组织，将肝脏固定到位。

慢慢操纵肝脏，以便于观察。流速和耗氧量测量对于监测肝脏的健康和功能至关重要。喂养和禁食肝脏之间的耗氧量通常略有不同，这可归因于禁食肝脏中糖发生引起的能量需求增加。

最重要的步骤包括以15度角插入导管，观察导管尖端，系紧缝线时滚动手腕和肩部，以及避免门静脉扭转。灌注后，可以使用任意数量的生化或分析方法研究切除的组织。离体灌注与实时MRI和光谱学相结合，可以实时测量代谢通量。

当然，这延伸到对疾病的反应而从控制状态对通量的扰动。