Dieses Video zeigt ein optimiertes Verfahren, das entwickelt wurde, um metabolische Leberstudien mit ausreichender Strenge und Reproduzierbarkeit durchzuführen, die als Leitfaden für die Durchführung der Leberresektion für ihre vivo-Perfusionsstudien dienen können. Die Technik wird am besten auf den Echtzeit-Stoffwechsel angewendet, um die Funktion in Umsatzmetaboliten in Krankheitsmodellen zu erkennen. Die Perfusion ermöglicht eine präzise Kontrolle der Nährstoffe und Hormone, die der Leber zur Verfügung stehen.
Obwohl die Technik nicht auf die Therapie ausgerichtet ist, können Leberdurchblutungen zum Verständnis der Ätiologie und der Auswirkungen von Krankheiten wie Diabetes, NAFLD und NASH auf den Leberstoffwechsel beitragen. Mit der Entwicklung neuer Arzneimittel werden Methoden zur Beurteilung des zentralen Energiestoffwechsels der Leber unerlässlich. Diese Methode kann mit Modellen verschiedener Krankheiten, einschließlich Krebserkrankungen, und in verschiedenen Stadien des Krankheitsverlaufs verwendet werden.
Legen Sie zunächst die Nase der Maus nach der Induktion der Anästhesie in einen Nasenkonus und kleben Sie ihre Pfoten ab. Lidocain durch eine subkutane Injektion bilateral in der vorderen Beckenkammregion verabreichen. Führen Sie einen Zehenquetschtest durch, um das Fehlen aller Schmerzreflexe zu bestätigen.
Führen Sie eine Zöliotomie durch, um die inneren Organe freizulegen, indem Sie einen drei Zentimeter breiten Schnitt machen. Erweitern Sie den Einschnitt mit einem Hämostat, der die Traktion durch Klemmen des Xiphoid-Prozesses zieht. Verwenden Sie einen Applikator mit Baumwollspitze, um den Dünn- und Dickdarm zu entfernen, der die Pfortader bedeckt.
Positionieren Sie eine Seidennaht unter dem Bogen der Pfortader proximal zur Leber. Platzieren Sie die zweite Seidennaht proximal oder distal der Vena mesenterica inferior distal von der Leber mit einer 2-0 Naht. Sobald die Nähte an Ort und Stelle sind, kanülieren Sie die Pfortader mit einem 22-Gauge-Katheter und halten Sie die Fase nach oben.
Geben Sie die Pfortader in einem Winkel von nicht mehr als 15 Grad ein. Binden Sie die erste Naht am Katheterzapfer vorbei. Nachdem die Pfortader kanüliert ist, verankern Sie den Katheter zwei bis drei Millimeter distal vom Ast der Pfortader mit der Seidennaht.
Befestigen Sie den unteren Teil des Katheters mit der zweiten Naht. Binden Sie einen Knoten mit der Naht, um den Katheter am distalen Teil der Pfortader und dem umgebenden Gewebe zu befestigen. Nachdem der Katheter gesichert ist, führen Sie eine Ein-Milliliter-Spritze mit einer 27-Gauge-Nadel mit 38,1 Millimetern Länge in den Katheter ein, um Blut- und Luftblasen zu spülen.
Verwenden Sie einen Silikonschlauch mit einem Innendurchmesser von einem Millimeter und einem Außendurchmesser von fünf Millimetern mit einem festen Stopphahn, um die Perfusionssäule an den Katheter zu koppeln, wodurch der Puffer in die Leber fließen kann und der Beginn der Perfusion markiert wird. Nach dem Starten eines Timers den erhöhten Gefäßdruck durch Einschnitt mit einer Schere in die untere Hohlvene entlasten. Bestätigen Sie den Fluss von Perfusat durch die Leber, indem Sie die homogene Veränderung der Leberfarbe von rosa oder rot zu einem blassgelben beobachten.
Sobald der Fluss bestätigt ist, entfernen Sie den Magen, den Dünndarm, den Dickdarm und die rechte Niere aus dem umgebenden Gewebe. Manövrieren Sie mit Hilfe des chirurgischen Assistenten die Leber um die Bauch- und Brusthöhle, während der Chirurg das parietale Peritoneum und das Thoraxgewebe durchschneidet, um die Leber zu resezieren. Heben Sie die Leber nach oben und schneiden Sie das verbleibende Bindegewebe, das die Leber an Ort und Stelle hält, mit einer Schere ab.
Manipulieren Sie langsam die Leber, um die Sicht zu erleichtern. Die Durchfluss- und Sauerstoffverbrauchsmessungen sind für die Überwachung der Gesundheit und Funktion der Leber von entscheidender Bedeutung. Es gibt oft einen leichten Unterschied im Sauerstoffverbrauch zwischen gefütterter und nüchterner Leber, der auf einen erhöhten Energiebedarf zurückzuführen ist, der durch die Glukogenese in der nüchternen Leber auferlegt wird.
Zu den wichtigsten Schritten gehören das Einführen des Katheters in einem Winkel von 15 Grad, das Visualisieren der Katheterspitze, das Rollen von Handgelenk und Schultern beim Binden der Naht und das Vermeiden von Torsion an der Pfortader. Das ausgeschnittene Gewebe kann nach der Perfusion mit beliebig vielen biochemischen oder analytischen Ansätzen untersucht werden. Ex-vivo-Perfusionen in Kombination mit Echtzeit-MRT und Spektroskopie ermöglichen die Messung von Stoffwechselflüssen in Echtzeit.
Dies erstreckt sich natürlich auf die Störung des Flusses aus einem Kontrollzustand als Reaktion auf die Krankheiten.
