Este vídeo demonstra um procedimento simplificado desenvolvido para realizar estudos hepáticos metabólicos com rigor e reprodutibilidade suficientes, que podem servir de guia para realizar a ressecção hepática para seus estudos de perfusão viva. A técnica é melhor aplicada ao metabolismo em tempo real para detectar a função, em metabólitos de rotatividade em modelos de doenças. A perfusão permite o controle preciso de nutrientes e hormônios disponíveis para o fígado.
Embora a técnica não seja direcionada para a terapia, as perfusões hepáticas podem ser fundamentais na compreensão da etiologia e do impacto de doenças, como diabetes, NAFLD e NASH no metabolismo hepático. À medida que novos fármacos são desenvolvidos, os métodos para avaliar o metabolismo de energia central hepática tornam-se essenciais. Este método pode ser usado com modelos de diversas doenças, incluindo cânceres e em vários estágios diferentes de progressão da doença.
Para começar, coloque o nariz do rato em um cone de nariz após a indução da anestesia, e amarre suas patas. Administrar lidocaína através de uma injeção subcutânea bilateralmente na região da crista ilíaca anterior. Realize um teste de beliscar o dedo do pé para confirmar a ausência de todos os reflexos da dor.
Realize a céliotomia para expor os órgãos internos fazendo uma incisão de três centímetros de largura. Expanda a incisão usando um hemostat que puxa a tração apertando o processo xiphoide. Use um aplicador de ponta de algodão para limpar os intestinos pequenos e grandes que cobrem a veia portal.
Posicione uma sutura de seda sob o arco da veia portal proximal ao fígado. Coloque a segunda sutura de seda proximal ou distal da veia mesentérica inferior distal do fígado usando uma sutura 2-0. Uma vez que as suturas estejam no lugar, cannulate a veia portal com um cateter calibre 22, mantendo o bisel apontando para cima.
Digite a veia do portal em não mais do que um ângulo de 15 graus. Amarre a primeira sutura após o batedor do cateter. Após a veia do portal ser canonizada, ancore o cateter de dois a três milímetros do ramo da veia portal com a sutura de seda.
Fixar a porção inferior do cateter com a segunda sutura. Amarre um nó com a sutura para fixar o cateter na porção distal da veia portal e do tecido circundante. Depois que o cateter estiver fixado, insira uma seringa de um mililitro com uma agulha calibre 27 com 38,1 milímetros de comprimento no cateter para lavar bolhas de sangue e ar.
Use um milímetro de diâmetro interno e um tubo de silicone de cinco milímetros de diâmetro externo com um galo de parada fixo para acoplar a coluna de perfusão ao cateter, permitindo o fluxo do tampão para o fígado, marcando o início da perfusão. Após iniciar um temporizador, alivie o aumento da pressão vascular por incisão usando uma tesoura na veia cava inferior. Confirme o fluxo de perfusato através do fígado observando a mudança homogênea na cor do fígado de rosa ou vermelho para um amarelo pálido.
Uma vez confirmado o fluxo, extir nosso estômago, intestino delgado, intestino grosso e o rim direito do tecido circundante. Com a ajuda do assistente cirúrgico, manole o fígado ao redor da cavidade abdominal e torácica enquanto o cirurgião corta o peritônio parietal e tecido torácico para ressecção do fígado. Levante o fígado para cima e corte os tecidos conjuntivos restantes segurando o fígado no lugar com uma tesoura.
Manipular lentamente o fígado para facilitar a visão. A taxa de fluxo e as medidas de consumo de oxigênio são vitais para monitorar a saúde e a função do fígado. Muitas vezes há uma pequena diferença no consumo de oxigênio entre fígados alimentados e em jejum, o que pode ser atribuído ao aumento das demandas energéticas impostas pela glucogênese no fígado em jejum.
Os passos mais importantes incluem inserir o cateter em um ângulo de 15 graus, visualizar a ponta do cateter, rolar o pulso e os ombros ao amarrar a sutura e evitar a torção na veia portal. O tecido excisado pode ser estudado após a perfusão com qualquer número de abordagens bioquímicas ou analíticas. Perfusões ex vivo em combinação com ressonância magnética em tempo real e espectroscopia permitem a medição de fluxos metabólicos em tempo real.
Naturalmente, isso se estende à perturbação do fluxo de um estado de controle em resposta às doenças.
