高速视频显微镜分析在原发性睫状体运动障碍一线诊断中的应用

高速视频显微镜分析是原发性睫状体运动障碍一线诊断的可靠工具。这种技术相对容易执行，快速，具有成本效益，并且在经验丰富的人手中是一种非常可靠的工具。适用于所有年龄组的患者。

视频显微镜检查还显示继发性纤毛功能。例如，由于细菌或病毒感染。但它主要用于诊断原发性纤毛运动障碍。

科学家也使用这种方法来可视化活细胞中的细胞内过程或生物功能。协助我完成这一程序的将是我们的实验室技术员Tina Peromaa女士。

在收集呼吸道上皮细胞之前，请患者彻底擤鼻涕。当患者准备好时，用一只手固定患者的头部，另一只手使用0.6毫米大小的齿间刷刷刷鼻孔的下鼻甲，以收集足够的上皮细胞条。将收获的细胞条放入含有细胞滋养DMEM的1.5毫升微量离心管中。

关闭微量离心管的盖子后，将管保持在光源上并摇动管以发现收获的细胞条和砾岩。之后，将盖子正确关闭的微量离心管放在聚苯乙烯盒中。在关闭盒子之前，请确保管子固定在盒子内。

然后在盒子中加入冷敷，同时避免冻结试样。从聚苯乙烯盒中取出含有样品的微量离心管后，将一管置于显微镜加热单元的罩下，以升温至37摄氏度，以进行高速视频显微镜分析或HSVMA。接下来，启动计算机上的摄像机和视频单元的软件。

使用移液器取一小块样品，并将两滴样品放入比色皿中。用盖子盖住比色皿，然后将其置于显微镜下。使用放大倍率为100倍的油浸透镜，并将一滴浸油滴在光学元件的表面上。

当用显微镜镜片接近培养皿的底部时，寻找没有红细胞且粘液含量低的细胞簇。在找到具有代表性的兴趣区域或ROI后，将重点放在一组具有最大纤毛运动的跳动纤毛上，并录制视频序列。记录细胞与跳动纤毛侧明智和从上面。

代表性分析显示，从侧面和上方看到的正常纤毛运动。原发性睫状体运动障碍或PCD患者DNAH11基因突变的样本显示，睫状动脉搏动的典型僵硬最小移动模式。从侧面和上方观看时。

在另一个具有相同突变的PCD患者中，观察到跳动纤毛的不同运动过度但低效的模式。在复发性上气道感染的患者中也可见病理性的睫状动脉搏动模式和纤毛搏动频率。如果严格执行刷牙程序，则无法进行HSVMA分析，因为纤毛上皮细胞被红细胞覆盖。

该程序中最重要的一步是从刷牙中获得足够的呼吸细胞，并保持这些材料保存完好，以便进行视频分析。剩余的材料可用于进行电子显微镜或免疫荧光显微镜检查，以检测纤毛中可能的结构缺陷或揭示缺陷和睫状蛋白的合成。