本研究的主要目的是使用盲肠结扎和穿刺诱导的脓毒症的小鼠模型来评估脓毒症的可靠血液生物标志物。盲肠结扎和穿刺，简称CLP，是一种临床相关的脓毒症模型。CLP是脓毒症研究中常用的模型。
瓜氨酸组蛋白 H3 或 CitH3 起源于脓毒症诱导的 NETosis。我们之前的研究表明，CitH3是脓毒症的可靠诊断生物标志物。选择雄性C57BL / 6小鼠。
称量小鼠，并通过吸入1.5%异氟醚麻醉小鼠。将鼠标固定在加热垫上。在腹部涂抹脱毛膏，放置不超过一分钟，然后去除乳膏和头发。
准备适合啮齿动物手术的无菌手术器械。用碘消毒腹部皮肤至少三次。用适当的无菌手术帷幔覆盖手术区域。
使用无菌手术剪刀沿着白线在腹壁上做一个大约两厘米的切口。用无菌镊子识别并分离盲肠。结扎75卷盲肠与4-0丝缝合。
不要结扎肠系膜血管。需要注意的是，不同百分比的盲肠结扎决定了脓毒症的严重程度。25% 导致低度脓毒症，50% 导致中度脓毒症，75% 导致高级别脓毒症。
在尾端和结扎之间的中点用 21 号针刺穿盲肠。通过穿透孔轻轻地将粪便挤出盲肠。需要注意的是，挤入腹膜腔的粪便量应一致，因为粪便也决定了败血症的严重程度。
轻轻地将盲肠和粪便放入腹腔。用6-0丝缝合关闭腹部肌肉层和皮肤层。用碘消毒切口。
注射酮洛芬，每公斤5毫克，应在腹部左下象限进行，以避免盲肠。将鼠标放在加热垫上，直到完全恢复。鼠标被安置在温度控制的房间里，可以自由获取食物和水。
动物将被二氧化碳过量安乐死，并出现败血症症状，这与我们根据我们提出的研究的预定义终点相关。将小鼠随机分为假手术组、CLP组和CLP加Cl-脒或YW3-56治疗组。假手术组小鼠接受除盲肠结扎和穿刺以外的所有CLP程序。
术后24小时采集外周血，并通过离心制备血清。通过蛋白质印迹和自主研发的 ELISA 试剂盒测定 CitH3 浓度。如图二所示，假组未检测到CitH3。
CLP插入后CitH3水平升高，PAD抑制显著减弱。根据我们的数据，我们得出结论，循环CitH3是脓毒症的可靠诊断生物标志物。
