El objetivo principal de este estudio es utilizar un modelo de ratón de ligadura cecal y sepsis inducida por punción para evaluar el biomarcador sanguíneo confiable de sepsis. La ligadura y punción cecal, o CLP en resumen, es un modelo clínicamente relevante de sepsis. CLP es un modelo comúnmente utilizado en la investigación de la sepsis.
La histona citrulinada H3, o CitH3, se origina a partir de la NETosis inducida por sepsis. Nuestro estudio anterior demuestra que CitH3 es un biomarcador diagnóstico confiable de sepsis. Seleccione ratones machos C57BL/6.
Pesar el ratón y anestesiar al ratón por inhalación de isoflurano al 1,5%. Fije el ratón en una almohadilla térmica. Aplique crema depilatoria en el abdomen y déjela por no más de un minuto antes de eliminar la crema y el vello.
Preparar instrumentos quirúrgicos estériles adecuados para la cirugía de animales roedores. Desinfecte la piel abdominal con yodo al menos tres veces. Cubra el área quirúrgica quirúrgica con la cortina quirúrgica estéril adecuada.
Use tijeras quirúrgicas estériles para hacer una incisión de aproximadamente dos centímetros en la pared abdominal, a lo largo de la línea alba. Identificar y aislar el ciego fuera de la cavidad peritoneal con pinzas estériles. Ligate 75 volumen del ciego con sutura de seda 4-0.
No ligar los vasos sanguíneos mesentéricos. Cabe señalar que un porcentaje diferente de ciego ligado determina la gravedad de la sepsis. El 25% conduce a una sepsis de bajo grado, el 50% conduce a la sepsis de grado medio y el 75% conduce a una sepsis de alto grado.
Perforar el ciego mediante una perforación completa con una aguja de calibre 21 en el punto medio entre el extremo de la cola y la ligadura. Exprima suavemente las heces del ciego a través de agujeros de penetración. Cabe señalar que la cantidad de heces comprimidas en la cavidad peritoneal debe ser consistente, ya que las heces también determinan la gravedad de la sepsis.
Reemplace el ciego y las heces en la cavidad abdominal suavemente. Cierre la capa muscular abdominal y la capa de piel con sutura de seda 6-0. Desinfecte la incisión con yodo.
La inyección de ketoprofeno, cinco miligramos por kilogramo, debe realizarse en el cuadrante inferior izquierdo del abdomen para evitar el ciego. Coloque el mouse en una almohadilla térmica hasta la recuperación completa. El ratón está alojado en una habitación con temperatura controlada y se le da acceso gratuito a alimentos y agua.
Los animales serán sacrificados por sobredosis de dióxido de carbono con síntomas de sepsis, relevantes para nuestros puntos finales predefinidos basados en nuestro estudio presentado. Los ratones se dividen aleatoriamente en el grupo simulado, el grupo CLP y el grupo de tratamiento CLP más Cl-amidina o YW3-56. Los ratones en el grupo simulado reciben todos los procedimientos de CLP excepto la ligadura de ciego y la punción.
Recolectar sangre periférica a las 24 horas postoperatorias y preparar el suero mediante centrifugación. La concentración de CitH3 se determinó mediante Western blot y un kit ELISA de desarrollo propio. Como se muestra en la figura dos, no se detectó CitH3 en el grupo simulado.
Los niveles de CitH3 se elevaron después del inserto de CLP, que se atenuó significativamente por la inhibición de la EAP. Basándonos en nuestros datos, concluimos que la CitH3 circulante es un biomarcador diagnóstico confiable de sepsis.
