Bu çalışmanın temel amacı, sepsisin güvenilir kan biyobelirteçlerini değerlendirmek için çekal ligasyon ve delinmeye bağlı sepsisin fare modelini kullanmaktır. Çekal ligasyon ve ponksiyon veya kısaca CLP, klinik olarak ilgili bir sepsis modelidir. CLP, sepsis araştırmalarında yaygın olarak kullanılan bir modeldir.
Sitrüllinlenmiş histon H3 veya CitH3, sepsis kaynaklı NETosis'ten kaynaklanır. Önceki çalışmamız, CitH3'ün sepsisin güvenilir bir tanısal biyobelirteci olduğunu göstermektedir. Erkek C57BL/6 fareleri seçin.
Fareyi tartın ve% 1.5 izofluran soluyarak fareyi anestezi altına alın. Fareyi bir ısıtma yastığına sabitleyin. Karnına tüy dökücü krem uygulayın ve kremi ve saçları çıkarmadan önce bir dakikadan fazla bekletmeyin.
Kemirgen hayvan cerrahisi için uygun steril cerrahi aletler hazırlayın. Karın derisini iyotla en az üç kez dezenfekte edin. Ameliyat bölgesini uygun steril cerrahi perde ile örtün.
Karın duvarında, linea alba boyunca yaklaşık iki santimetrelik bir kesi yapmak için steril cerrahi makas kullanın. Çekumu peritoneal boşluktan steril cımbızla tanımlayın ve izole edin. Çekumun 75 hacmini 4-0 ipek dikişle bağlayın.
Mezenterik kan damarlarını yağlamayın. Dikkat edilmesi gereken, çekum ligatının farklı yüzdesi sepsisin şiddetini belirler. %25'i düşük dereceli sepsise, %50'si orta dereceli sepsise ve %75'i yüksek dereceli sepsise yol açar.
Çekumu, kuyruk ucu ile ligasyon arasındaki orta noktada 21 gauge iğne ile bir kez içinden ve içinden delin. Dışkıyı nüfuz deliklerinden çekumdan yavaşça sıkın. Dikkat edilmesi gereken, periton boşluğuna sıkılan dışkı miktarı tutarlı olmalıdır, çünkü dışkı aynı zamanda sepsisin şiddetini de belirler.
Çekumu ve dışkıyı karın boşluğuna nazikçe değiştirin. Karın kas tabakasını ve cilt tabakasını 6-0 ipek dikişle kapatın. Kesini iyotla dezenfekte edin.
Ketoprofen enjeksiyonu, kilogram başına beş miligram, çekumu önlemek için karnın sol alt çeyreğinde yapılmalıdır. Tamamen iyileşene kadar fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin. Fare, sıcaklık kontrollü bir odaya yerleştirilir ve yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlanır.
Hayvanlar, sunulan çalışmamıza dayanarak önceden tanımlanmış son noktalarımızla ilgili sepsis semptomları ile aşırı dozda karbondioksit ile ötenazi yapılacaktır. Fareler rastgele sahte grup, CLP grubu ve CLP artı Cl-amidin veya YW3-56 tedavi grubuna ayrılır. Sahte gruptaki fareler, çekum ligasyonu ve delinmesi hariç tüm CLP prosedürlerini alırlar.
Periferik kanı ameliyat sonrası 24 saatte toplayın ve santrifüjleme yoluyla serum hazırlayın. CitH3 konsantrasyonu, batı lekelenmesi ve kendi geliştirdiği bir ELISA kiti ile belirlendi. Şekil ikide gösterildiği gibi, sahte grupta CitH3 saptanmadı.
CLP sokulmasından sonra CitH3 seviyeleri yükseldi ve PAD inhibisyonu ile önemli ölçüde zayıfladı. Verilerimize dayanarak, dolaşımdaki CitH3'ün sepsisin güvenilir bir tanısal biyobelirteci olduğu sonucuna vardık.
